髓母细胞瘤与室管膜瘤脑脊液差异凝胶电泳方法的建立.pdfVIP

基金项目：吉林省科技厅青年科研基金计划项目 （项目编号）吉林省科技厅社发处计划项目（项目编号３ ）  通讯作者 文章编号： １００７ ４２８７ （ ２０１４ ） ０８ １２３９ ０４ 髓母细胞瘤与室管膜瘤脑脊液 差异凝胶电泳方法的建立 李文臣 １，崔佳乐 ２，李 日 ３，罗毅男 １，洪新雨 １ （ １． 吉林大学第一医院 神经外科，吉林 长春 １３００２１ ； ２． 吉林大学白求恩医学院 组织学与胚胎学教研室，吉林 长春 １３００２１ ； ３． 吉林大学公共卫生学院 流行病与卫生统计学教研室，吉林 长春 １３００２１ ） 摘要：目的 建立脑脊液双向差异凝胶电泳方法，寻找髓母细胞瘤脑脊液、室管膜瘤脑脊液与正常脑脊液三者之 间的差异蛋白表达。方法 选取 ３ 例已确诊髓母细胞瘤患者脑脊液等体积混合为髓母细胞瘤组（ Ｍ ）； ３ 例已确诊室 管膜瘤患者脑脊液等体积混合为室管膜瘤组（ Ｅ ）； ３ 例正常脑脊液等体积混合为正常对照组（ ＣＯＮ ）；分别采用 １０％ ＴＣＡ ／冰丙酮沉淀法除盐提取蛋白；蛋白等量混合为内标组（ Ｓ ）；将各组蛋白分别经花青染料 Ｃ ｙ ２ 、 Ｃ ｙ ３ 和 Ｃ ｙ ５ 标记，混 合后进行双向差异凝胶电泳（ ２ＤＤＩＧＥ ），分别在波长 ４８８ ｎｍ 、 ５３２ ｎｍ 和 ６３３ ｎｍ 激发光下扫描，所获得图像用 ＤｅＣ ｙ  ｄｅｒ ５．０ 图像软件进行蛋白质表达差异分析。结果 ＤｅＣ ｙ ｄｅｒ 的胶内差异分析（ ＤＩＡ ）模块显示胶 １ 、胶 ２ 和胶 ３ 分别检 测到 １５５２ 、 １５４７ 和 １５６６ 个蛋白质点。 ＤｅＣ ｙ ｄｅｒ 的生物学差异分析（ ＢＶＡ ）模块显示表达量变化超过两倍的差异蛋白 质点，在髓母细胞瘤组与正常对照组中有 ３６ 个；室管膜瘤组与正常对照组中有 ７１ 个；而髓母细胞瘤组与室管膜瘤组 中有 ５２ 个。其中仅在髓母细胞瘤中上调的蛋白质点有 ８ 个，仅在室管膜组中升高的蛋白质点 １０ 个。结论 脑脊液 双向差异凝胶电泳方法的成功建立，为髓母细胞瘤与室管膜瘤脑脊液中标志蛋白探寻研究奠定了基础。 关键词：髓母细胞瘤；室管膜瘤；脑脊液；双向差异凝胶电泳 中图分类号： Ｒ７３９．４ 文献标识码： Ａ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｔｗｏｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｇ ｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏ ｐ ｈｏｒｅｓｉｓ ｕｓｉｎ ｇ ｃｅｒｅｂｒｏｓ ｐ ｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ ｆｒｏｍ ｐ ａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｄｕｌｌｏｂｌａｓ ｔｏｍａ ａｎｄ ｐ ａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｅ ｐ ｅｎｄ ｙ ｍｏｍａ ＬＩ Ｗｅｎｃｈｅｎ １ ， ＣＵＩ Ｊ ｉａ ｙ ｕｅ ２ ， ＬＵＯ Ｙｉｎａｎ １ ， ｅｔ ａｌ ． （ １．Ｄｅ ｐ ａｒｔｍｅｎｔ ｏ ｆ Ｎｅｕｒｏｓｕｒ ｇ ｅｒ ｙ ， Ｆｉｒｓｔ Ｈｏｓ ｐ ｉｔａｌ ｏ ｆ Ｊ ｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ ｙ ， Ｃｈａｎ ｇ ｃｈｕｎ １３００２１ ， Ｃｈｉｎａ ； ２．Ｄｅ ｐ ａｒｔｍｅｎｔ ｏ ｆ Ｈｉｓｔｏｌｏ ｇｙ ａｎｄ Ｅｍｂｒ ｙ ｏｌｏ ｇｙ ， Ｎｏｒｍａｎ Ｂｅｔｈｕｎｅ Ｃｏｌｌｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏ ｆ Ｊ ｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ ｙ ， Ｃｈａｎ ｇ ｃｈｕｎ １３００１２ ， Ｃｈｉｎａ ） Ａｂｓｔｒａｃｔ ： Ｏｂ ｊ ｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｔｗｏｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｇ ｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏ ｐ ｈｏｒｅｓｉｓ （ ２ＤＤＩＧＥ ） ａｎｄ ｔｏ ｆｉｎｄ ｏｕｔ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌ ｙ ｅｘ ｐ ｒｅｓｓｅｄ ｐ ｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｃｅｒｅｂｒｏｓ ｐ ｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ （ ＣＳＦ ） ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｅｄｕｌｌｏｂｌａｓｔｏｍａ ， ｅ ｐ ｅｎｄ ｙ ｍｏｍａ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｇ ｒｏｕ ｐ ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３ ｃａｓｅｓ ｏｆ ＣＳＦ ｏｆ ｍｅｄｕｌｌｏｂｌａｓｔｏｍａ （ Ｍ ） ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｂ ｙ ｐ ｏｓｔｏ ｐ ｅｒａｔｉｖｅ ｐ ａｔｈｏｌｏ ｇｙ ， ｔｈｅｎ ｐ ｏｏｌｅｄ ｂ ｙ ｅ ｑ ｕａｌ ａｍｏｕｎｔ ａｓ Ｍ ｇ ｒｏｕ ｐ ； ３ ｃａｓｅｓ ｏｆ ＣＳＦ ｏｆ ｅ ｐ ｅｎｄ ｙ ｍｏｍａ （ Ｅ ） ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｂ ｙ ｐ ｏｓｔｏ ｐ ｅｒａｔｉｖｅ ｐ ａｔｈｏｌｏ ｇｙ ， ｔｈｅｎ ｐ ｏｏｌｅｄ ｂ ｙ ｅ ｑ ｕａｌ ａｍｏｕｎｔ ａｓ Ｅ ｇ ｒｏｕ ｐ ； ３ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｎｏｒｍａ