微生物的分离、培养和菌种保藏详解.ppt

微生物的分离、培养和菌种保藏 微生物的分离、培养和菌种保藏 目的要求 实验材料 试验程序 思考题 目的要求 初步掌握微生物的分离、培养和菌种保藏的基本方法。 练习微生物接种、移植和培养的基本技术，掌握无菌操作技术。 实验材料 样品：新鲜土壤。 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏1号培养基。 无菌水：装有50mL无菌水三角瓶（配土壤悬液使用）、装有250mL无菌水三角瓶（梯度稀释使用）、4支空的无菌试管。 其它：取液器(5000 μl, 1000 μl, 各一支);无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴、水浴锅。 实 验 程 序 微生物的分离 微生物的接种方法（示范） 微生物培养中的氧气条件 微生物的菌种保藏方法 四大类微生物菌落形态的比较和识别 实验程序1 （微生物的分离） 用平板涂抹法分离土壤中的放线菌 用平板划线法分离污水中的细菌 微生物的分离—稀释平板法 制备土壤稀释液：(无菌操作过程见教师示范） 1. 称取土壤0.5g，放入50mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即为稀释10－2的土壤悬液。 2. 另取装有4.5mL无菌水试管4支，用记号笔编上10－3、10－4、10－5、10－6。取已稀释成10－2的土壤液，振荡后静止0.5min，用无菌吸管吸取0.5mL土壤悬液加入10－3的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10－3土壤稀释液。同法依次连续稀释至10－4 、10－5、10－6土壤稀释液。 在土壤稀释过程中，应用一支吸管由浓到稀，稀释到底，稀释方法见图-1。 微生物的分离—平板涂抹法 每组取无菌培养皿2付。在皿底贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。 凝固后，另取一支吸管吸取10－3或10－4的土壤稀释液0.2mL放在平板上。 用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂抹均匀。倒置于28～30℃条件下培养6～7d，观察放线菌菌落形态及计数菌落，并计算出每g土壤中放线菌的数量（方法同上）。 挑取单个菌落，接种于相应的斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化，至最后得到纯培养为止。 微生物的分离—平板划线法 每组取无菌培养皿1付，在皿底贴上标签，注明事项。取已熔化的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入平皿，制成平板。 凝固后，用接种环取相应的 菌液一环（10－5或10－6）在平板上划线（教师作示范）。 1.连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作连续划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。 2.分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环，先在培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养皿约600C角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划线。划线完毕，盖上皿盖，倒置于28～300C温室培养。 挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化，最后得到纯培养。 高氏培养基用于涂布平板（梯度稀释法取0.2ml，用推棒推匀）（浅色培养基） 牛肉膏培养基用于划线分离（分离所使用的污水在试管架的试管中） 实验程序2 （微生物的接种方法—斜面接种法） 左手平托两支试管，拇指按住试管底部。外侧使是菌种试管，内侧是待接的空白斜面。（两支试管的斜面同时向上），右手将棉塞旋松，以便在接种时容易拔出。 右手拿接种环，在火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部位也过火灭菌。 将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指和掌心将两支试管的棉塞一并夹住拔出，棉塞仍夹在手中，然后让试管口缓缓过火焰。 将已灼烧过的接种环伸入外侧的菌种试管内。先冷却，而后再用环沾取一定量的菌苔，将沾有菌苔的接种环抽出试管。 迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管的底部，轻轻向上划线（直线或曲线）。 接好种的斜面试管口再次过火焰，棉塞底部过火焰后立即塞入试管内。 将沾有菌苔的接种环在火焰上烧红灭菌。先在内焰中烧灼，使其干燥后，再在外焰中烧红，以免菌苔骤热，使菌体爆溅，造成污染。 放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口2～3cm处贴上标签。 28～37 ℃ 恒温培养。 微生物的接种方法—液体接种和穿刺接种 液体接种法：包括从斜面菌种接入培养液，或从液体菌