商品化的紫外可见分光光度计仪器。.ppt

一、概述 二、分光光度法的基本原理 2、定性分析 某个未知物的紫外吸收光谱如果峰较多，结构复杂，那么只用分光光度计是不能作为定性分析的，必须还要有色谱、红外、质谱、波谱等多种仪器的联合使用，才能做定性分析。 如果两吸收光谱的形状和吸收峰的数目、位置、拐点等完全一样，就可初步判断未知物与标准物是同一种物质，当然不排除特殊情况。 利用波长位置判断有机化合物的生色基团 3、学习与讨论部分 1、双光束比单光束好? 价格上，一般双光束比单光束贵。 光源波动方面，双光束可以抵消波长引起的误差，而普遍认为单光束不能，光源带来的影响有多大？而且光源的设计也在发展，对于单光路设置采集数据多次取平均能否改善？ 能量方面，双光束由一束变两束，能量减半？ 双光束的信噪比，光度准确度，基线飘移等都比单光束好。 2、透过率T%与吸光度A的关系 方法设置 数据采集（Data collection） 设置扫描范围，开始（start）值必须大于结束值（end） 纵坐标类型可选择的有：A，T%，E1(样品光路能量值)，E2（参考光路能量值），R% 仪器页面（Instrument） 狭缝宽度（Slit width）0.5、1、2或者4nm。通常所选择的狭缝宽度为所测量的谱带宽度的五分之一到十分之一。 数据间隔（Data interval）采样的数据间隔 校正页面（Correction） 校正用来规定多长时间采集一次基线，基线的类型，反射设置和吸收光度设定。 设置基线校正模式： Always at task start Always before next measurement As required at task start As required before next measurement 数据处理(Processing) 处理程序是UV Winlab当中特色部分。处理程序允许在某些方式下改变光谱，或者另一个光谱可以从原始的光谱创建。具体操作步骤： Processing页面，点击“Add”，增加一个处理步骤，也可以增加多个，处理步骤排列的顺序就是它们被执行的顺序。因而可以针对性的进行“Up，Down”调整。可选择的处理选项有： Arithmetic，数学计算，即把光谱当数字一样进行运算。 Convert X 横坐标转换(nm和cm-1) Convert Y 纵坐标转换 Derivative 求导，导数光谱 使用光谱求导的目的：谱带没有完全分开时，判断谱带的中心点；或定量分析时，用来减少带宽的影响。 Difference 差谱 Interpolate 插值 Normalize 归一化 Peak Table 峰值表 Smooth 平滑 Equation 方程式 附件介绍 Universal Reflectance Accessory URA 可变角镜面反射模块。工作参数： 角度范围：8度-68度，测绝对或相对反射 波长范围：3100nm-190nm 样品尺寸：8mm-150mm，3mm-8mm之间的可用 custom-made sample holder 150 MM Intergrating Sphere Reflectance Accessory 积分球是内置漫反射附件。工作参数： 波长范围：2500nm-190nm 样品尺寸：8mm-150mm，3mm-8mm之间的可用 custom-made sample holder Specification 五、具体应用与讨论 紫外分光光度计的应用领域涉及制药、医疗卫生、化学、环保、食品、生物、材料等领域。 1、定量分析 绝对法： 标准法：相同测试条件下，分别测试标准样品溶液和被测样品 溶液的吸光度值A标和A样，然后计算。 标准曲线法：紫外可见分光光度计最常用的定量分析方法是标准曲线法,即先用标准配制一定浓度的溶液,再将该溶液配制成一系列的标准溶液。在一定波长下，测试每个标准溶液的吸光度，以溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。将测试样溶液吸光度值按曲线的位置查找出对应的浓度或含量。 原则上所配制的标准溶液的吸光度在0.1-1.5A范围内，吸收光度精度可达0.5%，值得注意的是，分析测试不是千篇一律的按照此标准，主要还跟仪器的参数特性有关。仪器杂散光指标尤为重要。 最小二乘法：实际上也是回归方程法，因为，分光光度法中试样的吸光度A与试样的浓度C之间的关系可用方程，C=aA+b描述，如果做标准曲线时求出的回归方程差，相关系数（R）不好，测定量误差就很大。因此，提出应用最小二乘法。 应该注意两点： 1、回归方程是在特定条件下求得的，不能随便套用 2、分光光度法中试样的吸光度与试样的