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高速逆流色谱与高效液相色谱 - 质谱联用全面分离和鉴定罗布麻叶化学成分 Yuchi Zhanga, Chunming Liua,?, Zhengkun Zhangb, JingWanga, GuimeiWua, Sainan Li 摘要： 高性能逆流色谱（HPCCC）和高性能液相色谱 - raphy - 质谱联用（HPLC-MS）被有效地用于分离和识别中国药材罗布麻混合提取物中的化学成分。对于HPCCC分离，四套溶剂体系中，正己烷 - 乙酸乙酯 - 乙腈 - 水（1.5:3.5:2:4.5，V：V：V：V）用乙酸乙酯 – 甲醇 - 水（5：2：5，V：V：V）和正丁醇甲醇–水（5:2:5，V：V：V）用于一步法分离由四个阶段。该HPCCC separationwas通过用正己烷 - 乙酸乙酯 - 乙腈 - 水的下层相填充柱发起（1.5:3.5:2:5，V：V：V：V）作固定相进行洗脱与上部相的正己烷 - 乙酸乙酯 - 乙腈 - 水（1.5:3.5:2:5，V：V：V：V）进行分离疏水化合物（尾部到头部）。然后，流动相被切换到的乙酸乙酯 - 乙腈 - 水的上层相（5：3：7，V：V：V）进行洗脱中度疏水性化合物，然后流动相切换到乙酸乙酯上层相醋酸甲醇 - 水（5:2：5，V：V：V）进行洗脱亲水性化合物，最后仍保留在柱中的亲水性化合物由正丁醇：甲醇：水的上层相（5:1：5，V：V：V）洗脱。 总共有16个识别出的化合物，包括加贯叶金丝桃素，贯叶金丝桃，阿曼托黄素，biapigenin，槲皮素，含扁蓄甙，乙酰化异槲皮素，金丝桃苷乙酰化，黄芪甙，三叶豆苷，异槲皮素，金丝桃苷，槲皮素-3-葡糖醛酸甙，芸香苷，绿原酸和槲皮素-3-O-β-D-葡糖基-β-D-吡喃葡糖苷已在为130min一步操作的四套溶剂体系已通过成功分离 。通过HPCCC分离出的化合物，分别由与HPLC-MS的混合标准数据以及NMR数据的比较。 关键词：罗布麻 HPCCC HPLC-MS 核磁共振 分离和鉴定 纯化 1. 前言 逆流色谱（CCC）本质上是一种液 - 液分配色谱法，CCC应用是 大多采用不相混溶的有机 - 水两相进行 溶剂体系[1-4]。由于两相之间的化合物分布的CCC分离原理[5]，通过常规CCC技术分离出的化合物的极性范围非常短，因此多数报告都在一定的分数[6-11]集中在几个主要化合物。在实践中，高速逆流色谱（高速逆流色谱法）三相溶剂系统已成功地应用于分离厂代谢产物[12,13]。最近，我们已经展示了一个简单和快捷的新型四级梯度洗脱模式，通过HPCCC（高效逆流色谱分离系统（图1））将罗布麻的混合提取物宽泛的极性化合物分离，这是远远比任何其他制备HPLC分离方法简单。为了快速识别和表征植物中大量存在的成分和同分异构体结构，液相色谱- 质谱联用（HPLC-MS）已成为最有力的一个技术.因此，考察这些成分的裂解途径进而获得重要的结构信息在这一研究领域[14?16]是很重要的。 罗布麻叶的有价值成分在中国和日本的传统医学，已经单独应用与许多草药制剂或与其他植物组合使用。药理研究表明，罗布麻具有广泛有益的活动，包括降低血压[17]，抗抑郁药物[18] [19]和antineurasthenia[20]。化学研究表明，主要成分为酚酸[21]和黄酮类化合物的复杂混合物。所以，本实验的目的是开发一种有效全面的方法使用HPCCC分离高纯度化合和使用HPLC-MS，1 H NMR（质子核磁共振光谱）以及UV（紫外）光谱来进行鉴定。 2，实验 2.1仪器设备 　 高速逆流色谱仪为每 形成于DE图谱HPCCC（动力学提取，英国）。多层螺旋分离柱的制备是一个绕28米×2.6mmI.D. 聚四氟乙烯管，直接到形成多层次盘绕给146毫升总容量的材料之一。从0.33变化在内部终端到0.58在外部端子（R =8厘米，β= r/ R，其中r是从线圈到夹持器轴的距离，R 1是旋转半径或距离的β值托轴线和离心机的中心轴线之间）。其旋转速度是可调的范围从0到1600转和800转被在本研究中使用。电喷雾电离质谱（ESI-MS）是使用在Finnigan LCQ离子阱质谱仪（热电菲尼根，圣何塞，CA，USA）。用高效液相色谱（HPLC）是在Waters2695耦合用Waters2998二极管阵列检测器（DAD）（Milford，马萨诸塞州，美国）。用核磁共振波谱仪光谱是在Bruker AV500（布鲁克BIOSPIN，Rheinstetten，德国） 2.2试剂和材料 　 乙酸乙酯，乙腈，正己烷，正丁醇，甲醇和乙醇均为分析纯（北京化学，北京，中国）。水是经纯化的Milli-Q水纯化系统（Millipore公司，波士顿，美国）。乙腈，乙酸和氘 methanolwere HPLC级