抗体-药物偶联物全面分析,确保安全有效.docVIP

抗体-药物偶联物：全面分析，确保安全有效 作者 孙金花，记者 董笑非，中国医药报 ? ? 在过去10年中，肿瘤治疗药物研发取得了极大的进展，尤其是生物制品的出现，增加了医生和患者对肿瘤药物的选择机会。传统的小分子化疗药物一般是非特异性 的（即可结合和影响其他生理靶点），并可能产生严重的副作用；相反，更具靶向性的单克隆抗体（mAb）药物一般具有非常强的选择性，虽然严重的不良事件 （包括输液反应、血小板减少症、急性肾功能衰竭、免疫毒性、肺毒性和潜伏病毒感染的易感性）也偶有发生，不过整体而言，其副作用相对较小。 ? ? 许多临床应用的单克隆抗体的研制最初使用的是鼠源性杂交瘤技术，含有非人类蛋白（鼠蛋白）。虽然这些抗体具有治疗作用，但其中的非人类蛋白可引起细胞因子 释放综合征或失控的高细胞因子血症，从而导致多个脏器损害。减少单克隆抗体中鼠蛋白比例的技术，包括嵌合化（即对鼠源单克隆抗体序列进行部分人源单克隆抗 体替代）和人源化（即基本完成人类序列替代）以减少毒性。人源化的抗体已经被批准用于治疗癌症、炎症、自身免疫性疾病、传染病和修复移植排斥反应。然而， 单克隆抗体的药代动力学（PK）和药效学（PD）非常复杂，取决于单克隆抗体的同种型、亚型、半衰期和目标适应证。 抗体-药物偶联物 ? ? 理想的药物就是把具有优异临床疗效的靶向特异性抗体和小分子药物的药代动力学结合起来，这就是抗体-药物偶联物（ADC）。抗体-药物偶联物结构是具有靶 向作用的单克隆抗体与具有特定药理学特性（如细胞毒作用）的化合物结合。然而，利用单克隆抗体把一种化疗药物靶向到肿瘤细胞，在实际操作中是一项复杂的技 术。单克隆抗体必须与一个具有治疗作用的细胞毒素偶联，并且这种结合足够稳定，而不至于释放大量细胞毒素进入全身循环；如果结合不稳定导致细胞毒素释放， 最终将引起靶向细胞对毒素的内化。同时，把细胞毒素偶联到单克隆抗体产生一种抗体-药物偶联物的制备过程，在偶联后应该保持该药物（抗体-药物偶联物）对 靶点的识别。对细胞毒素与每个完整的单克隆抗体结合的数量，以及未结合的单克隆抗体的水平必须加以控制，以减少批次之间的差异。 ? ? 基因泰克公司（已被罗氏收购）开发的emtansine（曲妥珠单抗，T-DM1）就是抗体-药物偶联物，它结合了单克隆抗体赫赛汀（曲妥珠单抗）与美登 素（maytansine）。曲妥珠单抗可靶向作用于乳腺癌和胃癌人表皮生长因子受体2（HER2），而emtansine是美登素的合成衍生物（美登素 是一种小分子毒素，可与微管蛋白结合，通过非还原的双-马来酰亚胺-丙二醇联合体防止微管形成）。曲妥珠单抗仅被批准用于HER2阳性的癌症，但曲妥珠单 抗并非能够促使所有的HER2阳性细胞凋亡。T-DM1结合了选择性地靶向HER2受体的曲妥珠单抗与强效的细胞毒性剂maytansine而杀死肿瘤细 胞（不管HER2是否诱导凋亡反应）。即T-DM1抗体与HER2受体结合，引起从偶联物释放的美登素细胞内化，进而杀死肿瘤细胞。体内外研究显示，与曲 妥珠单抗相比，T-DM1具有较好的整体疗效和药代动力学特性，并且毒性较低。T-DM1在最近的Ⅱ期临床试验中取得了成功。 ? ? 目前唯一被批准上市的抗体-药物偶联物Mylotarg（吉姆单抗-奥佐米星），因上市后对急性髓细胞性白血病临床试验显示出安全性和疗效问题，辉瑞公司于2010年6月21日自愿将其退市。 生物等效性研究的分析方法 ? ? 生物制品分析方法通常开始于创建适当制造工艺，然后通过其确认目标产品（起初是单克隆抗体，然后是抗体-药物偶联物）的正确结构和功能。监管机构提出的对生物制品分析包括对其分子结构、乙二醇微观不均一性、杂质、降解产物和生物利用度的研究。 ? ? 因为抗体-药物偶联物三个主要组成部分（单克隆抗体，连接器和细胞毒素）各个部分都需要充分满足某些特点，因此评价批次差异将会异常复杂。根据欧洲药品管 理局（EMA）的生物仿制药指南，“每一种单克隆抗体都是独特的，结构也会有微小的改变，进而显著影响其功能，即使是在同样的表达系统和相似的培养条件 下，也可能会产生一个不同特性的产品（例如，杂质和微观不均一性）”。 ? ? 抗体-药物偶联物结构完整性评价是使用如氨基酸测序（N-或C-末端）、生化检测、糖定位、高效液相色谱（HPLC）、电泳（即十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺 凝胶电泳[SDS]，等电点聚焦[IEF]和Western blot）、免疫测定（酶联免疫吸附试验[ELISA法]和Gyros），大分子的液相色谱-质谱法/质谱（LC-MS/MS）、磁共振（NMR）光谱、 分光法、X射线晶体学、肽图谱、超速离心法和其他物理化学方法，以证明纯化的单克隆抗体没有碎片、聚集和其他改变。特异性表征可通过体外细