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植物组培实验报告实验二、培养基的配制及灭菌实验目的熟悉植物组织培养的一般工作流程。了解培养基的成分、类型及特点。能正确进行培养基的配制及灭菌操作。实验原理植物组织培养是一项技术性强、无菌条件要求高的工作，对场地有一定的要求，需配备必要的仪器设备和器皿、器械，还必须熟练掌握每个环节的操作技术。植物组织培养的一般程序包括拟定培养方案、初代培养、继代扩繁、生根壮苗培养及驯化移栽，其基本操作技术包括培养基的配制及灭菌、外植体的选择与消毒、无菌接种与培养、试管苗生根与驯化移栽等。实验内容1、培养基的成分 以MS培养为例，其成分可以分为水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。１．水　作用：原生质体的组成成分，代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中。配制：培养基母液时要用蒸馏水：配培养基时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水。２．无机元素大量元素，指浓度大于0.5mmol/l的元素，有Ｎ、Ｐ、Ｋ、Ｃa、Ｍg、Ｓ等。其作用是：(1)N　功能：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，是生命结构和功能物质不可缺少的。供应形式：含有ＮＯ3－N又含ＮＨ4－N。ＮＨ4－N对植物生长较为有利。在制备培养基时以这两种形式供应。供应的物质有ＫＮＯ3、、ＮＨ4ＮＯ3等。有时，也添加氨基酸。(2)P　功能：是磷脂的主要成分，而磷脂又是细胞膜、细胞核的重要组成部分。磷也是核酸、ＡＴＰ、辅酶等的组成成分。组织培养中，磷不仅增加养分、提供能量，而且也促进对Ｎ的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。供应形式：常用的物质有ＫＨ2ＰＯ4或ＮaＨ2ＰＯ4等。(3)K功能：Ｋ对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系，它具有活化酶的作用。Ｋ增加时，蛋白质合成增加，维管束、纤维组织发达，对胚的分化有促进作用。但浓度不易过大，一般为１～３mg/l为好。供应形式：制备培养基时，常以ＫＣl、ＫＮＯ3 等盐类提供。(4) Ｍg、Ｓ和Ｃa功能：　Ｍg是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；Ｓ是含硫氨基酸所构成蛋白质的组成成分。Ｃa 是构成细胞壁的一种成分，Ｃa对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用，供应形式：以ＭgＳＯ4·7Ｈ2Ｏ和ＣaＣl2·２Ｈ2Ｏ提供。(5)微量元素　种类：指小于0.5mmol/l的元素，Ｆe、Ｂ、Ｍn、Ｃu、Ｍo、Ｃo等。功能：铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。同时，它又是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用。Ｂ、Ｍn、Ｚn、Ｃu、Ｍo、Ｃo等，也是植物组织培养中不可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长，发育异常现象。供应形式：因其在pH５.２以上，易形成Ｆe（ＯＨ）3的不溶性沉淀，故用Ｆe ＳＯ4·７Ｈ2Ｏ和Ｎa2-ＥＤＴＡ结合成螯合物使用。当某些营养元素供应不足时，愈伤组织表现出一定的缺素症状。如缺氮，会表现出一种花色素苷的颜色，不能形成导管；缺铁，细胞停止分裂；缺硫，表现出非常明显的褪绿；缺锰或钼，则影响细胞的伸长。３．有机化合物(1)碳水化合物供应形式：最常用蔗糖，葡萄糖和果糖也较好，麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖也有应用。使用浓度：２～３％，常用３％，即配制１升培养基称取３０g蔗糖，有时可用２.５％，但在胚培养时采用４～１５％的高浓度，因蔗糖对胚状体的发育起重要作用。用量注意：不同糖类对生长的影响不同。以葡萄糖效果最好，果糖和蔗糖相当，麦芽糖差一些；不同植物不同组织的糖类需要量也不同，代用品：在大规模生产时，可用食用的绵白糖代替。（2）维生素　种类：主要有VB1 （盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、VPP(烟酸)、VC(抗坏血酸) 、有时还使用生物素、叶酸、VB2等。一般用量为0.1～1.0mg/l。有时用量较高。功能：以各种辅酶的形式参与多种代谢活动，促进生长、分化作用。VB1对愈伤组织的产生和生活力有重要作用，VB6能促进根的生长，VPP与植物代谢和胚的发育有一定关系。VC有防止组织变褐的作用。(3)肌醇　又叫环己六醇，功能：参与构建细胞壁。由磷酸葡萄糖转化而来，进一步生成果胶物质。肌醇与6分子磷酸残基相结合形成植酸，植酸与钙、镁等阳离子结合成植酸钙镁，植酸可进一步形成磷脂，参与细胞膜的构建。能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。促进组织和细胞的繁殖、分化。使用浓度：一般为１００mg/l，(4)氨基酸　　功能：作为有机氮源，利于被细胞直接吸收利用。常用种类：甘氨酸，其它如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。特殊应用：用水解乳蛋白或水解酪蛋白，是牛乳用酶法等加工的水解产物，含有约二十种氨基酸的混合物，使用注意用量在10～1000mg/l之间。否则极易引起污染。（5）天然复合物　大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞