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实验一 肠道内菌群数量变化 表1 试验设计 组别 处理 对照组 基础日粮 试验组 抗生素组试验组 J-4菌剂组 试验组 试验组 蛋白胨 15.0g酵母粉 2.0g葡萄糖 20.0g可溶性淀粉 0.5g氯化钠 5.0g5%半胱氨酸 10.0mL西红柿浸出液 400.0mL吐温80 1.0mL肝提取液 80.0mL琼脂 20.0g蒸馏水 520.0mLpH7.0，121 ℃，15min高压蒸汽灭菌。用于培养双歧杆菌。 EMB（伊红美兰）培养基：蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氢二钾 2g琼脂 20~30g蒸馏水 1000ml2%伊红水溶液 20ml0.5 %美蓝水溶液 13mlPH为7.27.4 121 ℃，15min高压蒸汽灭菌。用于鉴别并培养大肠杆菌。 二、实验仪器 MLS-3020高压灭菌锅，微波炉，电热鼓风干燥箱，SK1200H型超声波震荡仪，DPH-2000型电热恒温培养箱，211型pH计，HH-4型恒温水浴锅，6450UV/Vis型紫外分光光度计，万能电炉，AR1140型电子分析天平。 后送实验室分析称取1，入50 mL锥形瓶中，加入9 mL无菌水，180 r/min振荡30 min，制成10-1溶液，分别稀释成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8溶液，取80 μL溶液NA、EMB、BBL、MRS培养基上涂布，将NA、EMB、MRS培养基培养基置于37℃恒温培养箱中培养，24~36 h后分别统计细菌总数、大肠杆菌、乳酸杆菌单菌落数量并记录；BBL培养基置于中进行培养，24~36 h后统计厌氧双歧杆菌单菌落数量并记录结果菌数量在30~300个为宜检测粪便中菌群的变化趋势。 大肠杆菌（EMB） 沙门氏菌（？） 肠球菌（？） 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 cfu数/平板 每ml中的cfu数 稀释度 乳酸杆菌（MRS） 双歧杆菌（BBL） 芽孢杆菌（NA） 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 cfu数/平板 每ml中的cfu数 （2）空肠内 稀释度为10-3 稀释度 大肠杆菌（EMB） 沙门氏菌 肠球菌 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 cfu数/平板 每ml中的cfu数 稀释度 乳酸杆菌（MRS） 双歧杆菌（BBL） 芽孢杆菌（NA） 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 cfu数/平板 每ml中的cfu数 （3）回肠内 稀释度为10-3 稀释度 大肠杆菌（EMB） 沙门氏菌 肠球菌 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 cfu数/平板 每ml中的cfu数 稀释度 乳酸杆菌（MRS） 双歧杆菌（BBL） 芽孢杆菌（NA） 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 cfu数/平板 每ml中的cfu数 （4）盲肠内 稀释度为10-4 稀释度 大肠杆菌（EMB） 沙门氏菌 肠球菌 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 cfu数/平板 每ml中的cfu数 稀释度 乳酸杆菌（MRS） 双歧杆菌（BBL） 芽孢杆菌（NA） 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 cfu数/平板 每ml中的cfu数 （5）粪便 稀释度为10-6 稀释度 大肠杆菌（EMB） 沙门氏菌 肠球菌 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 cfu数/平板 每ml中的cfu数 稀释度 乳酸杆菌（MRS） 双歧杆菌（BBL） 芽孢杆菌（NA） 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 cfu数/平板 每ml中的cfu数 1、血球计数板法　　（1）原理：　　利用血球计数板在光学显微镜下，查出芽孢个数，再用公式计算出1克样品中含芽孢个数。　　（2）仪器：　　血球计数板（25×16格），光学显微镜，刻度吸管，三角瓶，振荡器和玻璃球。　　（3）方法和步骤：?　　a、取样及样品制备：称取待测样品1克（精确到0.1克）装入盛有99毫升水的三角瓶中，然后用振荡器或加玻璃球摇匀，使菌液均匀分布。用刻度吸管自三角瓶吸取菌液1毫升，装入盛有9毫升水的试管或装有99毫升水的三角瓶中，摇匀（扩大稀释倍数）待用。　　b、制片：用吸管从摇匀的菌液中吸取少许菌液，从盖