小窝蛋白-1在脂多糖致肺微血管内皮细胞炎性损伤中的作用探讨.pdfVIP

中华危重病急救医学 2013年 12月第 25卷第 12期 ChinCritCareMed，December2013，Vol.25，No.12 ·论著· 小窝蛋白 -1在脂多糖致肺微血管内皮细胞 炎性损伤中的作用探讨 尤青海 张丹 孙耕耘 岳扬 徐秀娟 【摘要】 目的 探讨脂多糖（LPS）所致大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVEC）炎性损伤中小窝蛋白 -1（Cav-1） 的作用机制。 方法 将体外培养的 RPMVEC，分别进行 LPS 刺激时效实验和蛋白激酶 A（PKA）通路干预实验。 ①时效实验：以 10滋g/mLLPS 分别刺激 0、1、3、6、12、24h 后进行细胞单层通透性（伊文思蓝 - 白蛋白法）和 Cav-1 蛋白表达〔蛋白质免疫印迹试验（Westernblotting）〕检测；并于 LPS 刺激 0、10、30、60、90、120min 检测细 胞磷酸化小窝蛋白 -1（p-Cav-1）表达（Westernblotting）。 ②干预实验：以 10滋mol/L蛋白激酶 A 特异抑制剂 （PKI）与 RPMVEC 预孵育 30min 后再加入 10滋g/mLLPS 继续孵育，30min 后检测 p-Cav-1 表达，3h 后检测细 胞单层通透性及 Cav-1蛋白表达； 设未刺激组和 LPS 或 PKI 单独刺激组为对照。 结果 ①LPS 刺激 RPMVEC 后 1hCav-1 蛋白表达（积分 A 值）即开始上升（2.97±0.07），3h 达峰值（3.77±0.37），之后逐渐下降，但至 24h 时（1.45±0.18）仍明显高于 LPS 刺激 0h 时（1.12±0.08），组间比较差异有统计学意义（F＝178.047，P＝0.000）； LPS 可呈时间依赖性（0、1、3、6、12、24h）增加 RPMVEC 通透性（A 值），变化趋势与 Cav-1 蛋白表达一致，分别 为 （99.67±4.32）% 、（118.17±2.32）% 、（159.00±2.61）% 、（141.17±2.64）% 、（120.17±2.79）% 、（108.83± 2.04）%，组间比较差异有统计学意义（F＝345.869，P＝0.000）。 LPS 亦可呈时间依赖性增加 Cav-1 磷酸化： 10min 时 p-Cav-1 蛋白表达（积分 A 值）即开始升高（2.41±0.11），30min 达高峰（2.83±0.10），然后逐渐下降， 120min 时（1.04±0.04）恢复到基础水平（1.03±0.04），组间比较差异有统计学意义（F＝519.417，P＝0.000）。 ②PKI 与 LPS 预孵育可使 Cav-1 表达（积分 A 值：5.07±0.22 比 3.81±0.23，P＜0.01）及 p-Cav-1 表达（积分 A 值：3.93±0.23比 2.77±0.10，P＜0.01）较 LPS 刺激组进一步增加，并破坏 RPMVEC 屏障功能，使 RPMVEC 通 透性增加〔（184.17±5.49）%比（151.50±3.08）%，P＜0.01〕。 结论 Cav-1 及其磷酸化表达增加参与 LPS 诱导 RPMVEC 屏障损伤，PKA 信号通路通过调控 Cav-1 蛋白及其磷酸化表达参与 LPS 对 RPMVEC 的致损效应。 【关键词】 小窝蛋白 -1； 脂多糖； 肺微血管内皮细胞； 细胞单层通透性； 蛋白激酶 A； 大鼠 Role of caveolin-1 in pulmonary microvascular endothelial cells injury induced by lipopolysaccharide in rat YOU Qing-hai， ZHANG Dan， SUN Geng-yun， YUE Yang， XU Xiu-juan. Department of Respiratory Medicine， the First Affiliated Hospital of Anhui Medical University， Hefei 230022， Anhui， China Corresponding author： SUN Geng-yun， Email： sungengyun@ 【 Abstract 】 Objective To investigate the role of caveolin-1 （Cav-1） in the modulation of rat pulmonary microvascularendothelialcells（RPMVEC） injuryinducedbylipopoly