生物发光法快速检测细胞内三磷酸腺苷-丁香园.pdfVIP

第 34卷第 l期第 6l页 2005年 2月 华中科技大学学报 (医学版) Acta M ed Univ Sci Technol Huazhong V01． 34 No． 1 P．61 Feb． 2005 生物发光法快速检测细胞内三磷酸腺苷* 郝巧玲 吕 斌 周宜开 程光明 华中科技大学同济医学院公共卫生学院环境医学研究所 ，武汉 430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院心外科，武汉 430022 摘要 目的 建立检测细胞内三磷酸腺苷 (ATP)含量的生物发光方法，并利用该方法检测红细胞和不 同再灌注 处理心肌细胞内 ATP的含量。方法 制备所需测定的细胞 ATP提取液，采用荧光素一荧光素酶检测系统检测 ATP含 量 ，ATP的含量与系统中所发射的光子数成正 比，发光强度越大，ATP含量越高 ，通过检测发光强度计算 ATP的含 量。结果 通过对红细胞内 ATP含量的测定，确定了测定细胞内ATP的最佳反应条件：pH=7．8，温度 2O～25℃， 荧光素酶浓度 3．0 mg／ml。利用确定的最佳条件对各种不同处理的心肌细胞内 ATP浓度进行 了检测，ATP检测结果 与心肌功能的实验观察结果符合。结论 生物发光方法测定 ATP含量方法简单、结果可靠，可以在短时间内得到检 测结果，是一种检测细胞内 ATP的有效方法 。 关键词 三磷酸腺苷； 生物发光； 荧光素一荧光素酶 中图法分类号 R446．61 Rapid Detection of ATP Concentration in Cells Using Bioluminescence M ethod Hao Qiaoling，Ln Bing△．Zhou Yikai et al Institute of Environmental Medicine，School of Public Health，Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030 Abstract 0bjective To set up the bioluminescence method of detecting ATP concentration in cels．Methods The ATP eell extract was prepared and by using the luciferace-liciferin bioluminescence system，the ATP concentration was detected bv counting the photos that the system emitted．ATP concentration was positively related with the photos number． The stronger luminescence detected，the higher ATP concentration was．Results 0primal work condition was：pH 7．2，temperature 20~ 25 ℃，luciferase concentration 3．0 mg／m1．ATP concentrations in different treated rat heart cels were detected under the optimal condition．ATP concentrations detected by bioluminescence method were in accord with the heart function detection． Conclusion bioluminescence method iS rapid，simple and reliable tO detect cel ATP concentration． Key words adenosine triphosphate； bioluminescence； luciferase-luciferin 三磷酸腺苷 (ATP)是体内最重要 的能量来 源，在维持生物体的正常机能上有着无可替代的作 用。迅速而准确地测定细胞内 ATP，对于研究细 胞乃至机体的生理活性和代谢过程都有非常重要的 意义。 本研究利用荧光素一荧光素酶反应系统，建立 检测细胞内 ATP含量的生物发光方法，用该法检 测不同处理因素作用下的心肌细胞内 ATP含量。 并将细胞内 ATP含量与心肌功能进行对比分析。 1 材料和方法 1．1 主要试剂与仪器 1．1．1 主要 试剂 ：0．2 mol／L Tris—HC1缓