REACH法规卷译稿.docVIP

B.23 哺乳动物精囊染色体变异测定 1. 方法 本方法是对OECG TG 483,哺乳动物精原细胞染色体畸变检测(1997)的重复。 1.1 引言 哺乳动物体内精原细胞染色体畸变检测的目的是为了辨识确认能引发哺乳动物精原细胞染色体结构畸变的物质(1)(2)(3)(4)(5)。结构畸变有两种类型,包括染色体畸变和染色单体畸变。大多数化学诱变剂诱发的畸变类型为染色单体型畸变,但染色体畸变也会发生。本方法不是旨在检测染色体的数目畸变,也不能用于惯常的数目畸变检测。许多人类遗传病直接或间接地由染色体突变引起。 本方法检测染色体在精原细胞中的活动，从而有望预见引起生殖细胞可遗传突变的诱导效应。 惯常用啮齿类动物作为检测材料。这种体内细胞基因检测方法是为检测精原细胞有丝分裂是的染色体畸变，其他细胞不作为本方法的研究对象。 为检测精原细胞染色单体型畸变，应检查处理过的细胞的第一次有丝分裂，以免损伤在其后的细胞分裂中遗失。处理过的精原细胞的更多信息可通过分析第一次减数分裂的浓缩期至中期，当精原细胞变为精母细胞时的染色体型畸变而获得。 这种体内检测是为了研究体细胞突变在生殖细胞中是否也为活性，另外，精原细胞检测方法很适宜于评估引起突变危险的可能性，因为它考虑到了体内新陈代谢、药代动力学和DNA修复过程等多种因素。 利用化学品处理下的光谱灵敏的变化可以表现出睾丸中产生的大量育精囊。因此，探测的变异随着越来越多的分化的精原细胞的支配表现出处理的精囊细胞群的总体响应。由于它们在睾丸中的位置，不同代的精原细胞可能会或可能不会暴露在通常的流量中，这取决于物理和生理塞尔托利细胞隔离和血液-睾丸隔离。 如果有迹象表明被测物或反应的代谢产物不能到达目标组织，本检测方法不适用。 请再参看引言B部分。 1.2. 定义 染色单体性畸变：染色体结构损伤的一种，表现为单个染色单体的损伤或染色单体间的损伤与重组。 染色体型畸变： 染色体结构损伤的一种，表现为同位染色单体的损伤或损伤与重组。 Gap：一种非染色体损伤。 数目畸变：在所用动物正常染色体数目基础上发生的染色体数目的改变。 多倍性:多重的单倍体染色体的细胞，而不是双倍数目(如3n, 4n等等)。 结构畸变：通过显微镜可观测到染色体结果变异。 1.3. 检测方法原理 检测物可通过合适的给药途径处理动物。然后再将其在合适的时间杀死。在杀死之前，动物要先用中期抑制剂处理（如：秋水仙碱和秋水仙素）。备用染色体可以从生殖细胞中获得并着色，处于分裂中期的细胞要对其进行染色体畸变分析。 1.4.检测方法概述 1.4.1. 准备工作 1.4.1.1.动物物种选择 一般用中国产雄性大鼠或小鼠，但也可使用其它合适的雄性哺乳动物。通常使用年轻健壮的成体作为处理对象。笼子的布置安排应尽可能地减小可能由此产生的影响。 在研究开始时，动物体重变化范围应尽可能小，不超过平均体重的±20%。 1.4.1.2.居住和饲养条件 可采用引言B部分指的是的通用条件,但湿度要达到50~60%。 1.4.1.3.动物准备 年轻健壮的成体可以作为控制和处理的对象。笼子的布置安排应尽可能地减小由此产生的影响。在研究开始之前，动物应先适应实验室环境至少5天以上。 1.4.1.4. 药剂准备 固体检测物应溶解或悬浮于合适的溶剂或媒介中。在喂服之前可稀释。液体检测物可直接喂服也可稀释后喂服。除非稳定性允许贮藏，应使用新鲜配制的检测物。 1.4.2. 控制条件 1.4.2.1. 溶剂/媒介 在所用的剂量标准下，溶剂/媒质不应产生毒性效应，也不能存在与检测物反应的可能性。如果使用熟知溶剂/媒介以外的其它物质时，应有显示它们相溶性的实验数据资料的支持。建议只要条件允许，应首先考虑用水做溶剂/媒介。 1.4.2.2. 对照 每次检测都应同时包含有阳性和阴性（溶剂/媒介）对照。除用被测物处理以外，控制群体中的动物应受到与处理群体中的动物相同的对待。 阳性对照在处理标准期待给出可探测的增加时应在精原细胞中产生活体结构染色体变异。 阳性的对照组应该被选用一边有清晰的作用但是并不一定可以立即向读者展现密码的特征。以一条不同的路径管理对照组阳性的结果并且只进行单一的取样是可接受地 。当可得的时候化学的班级使用相关阳性的对照组化学药品应被考虑到。包括物质的阳性对照组的例子: 物质 CAS No. EINECS No. 环磷酰胺 一水环磷酰胺 50-18-0 6055-19-2 200-015-4 环乙胺 108-91-8 203-629-0 丝裂霉素C 50-07-7 200-008-6 单体丙烯酰胺 79-06-1 201-173-7 替姆 51-18-3 200-083-5 溶剂或介质单独处理的阴性的对照组, 应该在每个取样的时候被用到，除非在组里被相同的方式