第三节非细胞型微生物的形态与分类讲述.ppt

2、噬菌斑 将少量的噬菌体与大量的宿主细胞的混合液与琼脂培养基在培养皿中充分混匀，培养后肉眼可见一个个透亮不长菌的小圆斑，即为噬菌斑。 3、空斑 病毒在宿主单层细胞培养物上形成一个与噬菌斑类似的肉眼可见的局部病损区域，称之为蚀斑或称空斑。 病毒在植物叶片上形成的局部坏死斑，称之为枯斑（病斑）。 4、枯斑 苹果花叶病 三、病毒的繁殖方式 毒粒 宿主细胞 具有感染性的毒粒消失,有繁殖性的病毒基因组 病毒基因组复制、表达 病毒核酸和蛋白质 装配形成具有感染性的毒粒 释放至细胞外 原料； 能量； 生物合成场所； （一）噬菌体的繁殖方式 以原核生物的病毒 — 噬菌体为例 基本形态为蝌蚪形、球形、和丝状三种。 头部：廿面体对称结构，由蛋白质衣壳构成，内含一条DNA。 颈部：薄盘状，附颈须。 尾鞘：衣壳粒螺旋对称；可伸缩 尾髓:中空，DNA可由此进入细胞。 基板: 六角形盘状物，其上有刺突、尾丝。 刺突: 有吸附功能。 尾丝: 有识别吸附功能。 大肠杆菌T4噬菌体构造 蝌蚪形噬菌体的构造 （以大肠杆菌T4噬菌体为例） 噬菌体的繁殖一般分为5个阶段，即 ①吸附 ②侵入 ③增殖（复制与生物合成） ④成熟（装配） ⑤裂解（释放） 烈性噬菌体： 凡在短时间内能连续完成以上5个阶段而实现其繁殖的噬菌体。 感染细胞后，能在寄主细胞内增殖，产生大量子代噬菌体并引起细菌裂解的噬菌体。 温和噬菌体： 进入菌体后并不进行增殖或引起溶菌的噬菌体。 感染细胞后，将其核酸整合（插入）到宿主的核DNA上，并且随宿主DNA的复制而进行同步复制，在一般情况下不引起寄主细胞裂解的噬菌体。 温和噬菌体 烈性噬菌体所经历的繁殖过程，称为裂解性周期或增殖性周期。 1、吸附 尾丝尖端与宿主细胞表面的特异性受体接触，可触发尾丝散开，附着在受体上，随之把刺突、基板固定。 分别吸附于大肠杆菌性毛和菌体上的噬菌体 侵入又称病毒内化，它是一个病毒吸附后几乎立即发生，依赖于能量的感染步骤。 2、侵入 不同的病毒－宿主系统的病毒侵入机制不同 噬菌体：采用注射方式将噬菌体核酸注入细胞 噬菌体尾部的酶水解细胞壁的肽聚糖，使细胞壁产生小孔；尾鞘收缩，核酸通过中空的尾管压入胞内，蛋白质外壳留在胞外。 DNA注入 病毒基因组的表达与复制存在着强烈的时序性 病毒基因组进入胞内 宿主细胞的代谢发生改变 病毒利用宿主的生物合成机构和场所，使病毒核酸表达和复制，产生大量的病毒蛋白质和核酸。 3、增殖 新合成的毒粒结构组分组装成完整的病毒颗粒的过程称为成熟，亦称做病毒的装配。 4、成熟 DNA分子的缩合 通过衣壳包裹DNA而形成头部 尾丝和尾部的其他部件独立装配完成 头部与尾部相结合 最后装上尾丝 主要步骤有： 噬菌体增殖、成熟过程 5、裂解 当宿主细胞内的大量子代噬菌体已成熟后，由于水解细胞膜的脂肪酶和水解细胞壁的溶菌酶的作用，从细胞内部促进了细胞的裂解，从而实现了噬菌体的释放。 温和噬菌体侵入相应宿主细胞后，由于前者的基因组整合到后者的基因组上，并随后者的复制而进行同步复制，因此，这种温和噬菌体的侵入并不引起宿主细胞裂解，此即称溶源性或溶源现象。 （二）溶源性 预防噬菌体污染的措施主要有： 　　（1）决不使用可疑菌种 认真检查斜面、摇瓶及种子罐所使用的菌种，坚决废弃任何可疑菌种。 　　（2）严格保持环境卫生。 　　（3）决不排放或随便丢弃活菌液 环境中存在活菌，就意味着存在噬菌体赖以增殖的大量宿主，其后果将是极其严重的。为此，摇瓶菌液、种子液、检验液和发酵后的菌液绝对不能随便丢弃或排放；正常发酵液或污染噬菌体后的发酵液均应严格灭菌后才能排放；发酵罐的排气或逃液均须经消毒、灭菌后才能排放。 　　（4）注意通气质量 空气过滤器要保证质量并经常进行严格灭菌，空气压缩机的取风口应设在30～40米高空。 　　（5）加强管道及发酵罐的灭菌。 　　（6）不断筛选抗性菌种，并经常轮换生产菌种。 　　（7）严格执行会客制度。 *Shengyuan Yang Ph.D 07/16/96 * ## ①尽快提取产品，如果发现污染时发酵液中的代谢产物含量已较高，即应及时提取或补加营养并接种抗噬菌体菌种后再继续发酵，以挽回损失；②使用药物抑制，目前防治噬菌体污染的药物还很有限，在谷氨酸发酵中，加入某些金属螯合剂（如0.3～0.5％草酸盐、柠檬酸铵）可抑制噬菌体的吸附和侵入；加入1～2μg／ml金霉素、四环素或氯霉素等抗生素或0.1～0.2％的“吐温60”、“吐温20”或聚氧乙烯烷基醚等表面活性剂均可抑制噬菌体的增殖或吸附；