葡萄酒中8种生物胺的测定详解.ppt

  1. 1、本文档共23页,可阅读全部内容。
  2. 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
葡萄酒中8种生物胺的测定 采用高效液相色谱法,柱前衍生,以1,7-二氨基庚烷为内标,测定葡萄酒中色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺和亚精胺含量。 生物胺简介 生物胺是一系列含氮低分子有机碱, 可分为单胺和多胺两类, 包括酪胺、组胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、色胺、精胺和亚精胺等多种物质。 生物胺除了存在于各种动植物的组织中,还普遍存在于多种食品中,尤其是发酵食品如奶酪、发酵香肠、啤酒、黄酒、葡萄酒中等。 生物胺的作用 微量的生物胺是生物体内正常的活性成分, 在生物活性细胞中具有重要功能,其中多胺对细胞的生长和增殖具有重要作用。 生物胺作为药用( 鹿茸中的药用成分) 有重要的生理功能, 如: 促进生长、增强代谢活力、加强肠道免疫系统、控制血压, 并在神经系统中有活性, 在消除自由基方面也有一定的作用等。 过量摄入的危害 当人体摄入过量的生物胺时,就会引起诸如头痛、恶心、心悸、血压变化、呼吸紊乱等过敏反应,严重的还会危及生命。 生物胺中以组胺对人体健康影响最大,海产鱼中的青皮红肉鱼类含组胺较高,当鱼不新鲜或腐败时,鱼体中游离的组胺酸经脱羧酶作用产生组胺。 许多国家已经作出了葡萄酒中组胺的限量范围。 澳大利亚、匈牙利和瑞士--10 mg/L 法国--8 mg/L 比利时--6 mg/L 荷兰--3.5 mg/L 德国--2 mg/L 我们国家鱼类中组胺的限量 鲐鱼—100mg/100g 其他含组胺的鱼类—30mg/100kg 葡萄酒中的生物胺 葡萄酒中的生物胺含量与葡萄品种、气候条件、葡萄卫生状况、酒种、酿造工艺、储存条件等诸多因素相关。 曾有报道研究了葡萄牙产区不同年份的葡萄酒中生物胺变化 在2003 年的葡萄酒中,酪胺和异戊胺的含量较高 在2004 年的葡萄酒中,腐胺为主要的生物胺 这可能是由于不同年份气候条件的变化,自然的微生物菌群与葡萄组分的不同而引起这种差异。 高效液相色谱法测定8种生物胺原理 生物胺自身没有荧光和紫外的发色基团,因此需要经过衍生化处理,才能在色谱仪器检测出来。 丹磺酰氯(Dns-Cl)可以和伯胺或仲胺基上的活泼氢发生反应,脱掉一分子的HCl,生成具有紫外和荧光的衍生物。 以1,7-二氨基庚烷为内标,经过氯仿-正丁醇(1:1)液液萃取净化后,以丹磺酰氯为衍生剂,60℃衍生30min,采用C18柱分离,紫外检测器检测,外标法定量。 样品处理—萃取 量取葡萄酒5mL,加入适量氯化钠使溶液饱和。准确量取上述饱和后的试样提取液5mL,置于15ml离心管中,用0.1mol/L NaOH溶液调节pH至12.0。 加入5mL的正丁醇-氯仿(1:1)混合液,涡旋振荡5min,3600r/min离心10min,吸取上层有机相,再重复萃取2次,合并萃取液,混匀,取3mL萃取液并加入0.2mL1mol/L HCl ,混合后40℃水浴下氮气吹干,加入1mL 0.1mol/L HCl 复溶,待衍生。 样品处理—衍生 取上述待衍生的试样溶液0.5mL 置10mL具塞试管中,加入1.5mL饱和碳酸氢钠溶液、1.0mL(5mg/mL丙酮)丹磺酰氯衍生剂,振荡使混匀。 置60℃培养箱中反应30min,中间振荡2次,取出,分别加入100μL谷氨酸钠(50mg/ml饱和碳酸氢钠溶液),振荡混匀,60℃保温15min。 取出,每个试管中加入1mL超纯水,在40℃水浴用氮气除去丙酮。加入3mL乙醚,振荡2min,静置分层后,吸取出上层有机相(乙醚层),重复萃取2次,合并乙醚萃取液,氮气吹干。 加入1.0mL甲醇使残留物溶解,振荡混匀,0.22μm微孔滤膜过滤,滤液待测。 标准系列 分别移取0.5mL的1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0 mg/L生物胺标准系列溶液,分别置10ml具塞试管中。 依次加入20μL(100mg/L)内标使用液,加入1.5mL饱和碳酸氢钠溶液、1.0mL(5mg/mL丙酮)丹磺酰氯衍生剂,振荡使混匀。置60℃培养箱中反应30min,以下操作同试样的衍生步骤。 液相色谱参考条件 色谱柱为C18柱, (150 mm×4.6mmID,5μm),紫外检测波长254nm,进样量10μL,柱温30℃,流速:1.5mL/min。 梯度洗脱程序 流动相A为甲醇溶液,B为超纯水。 时间 0 7 14 20 27 30 35 36 45 流动相A 55 65 70 70 90 100 100 55 55 流动相B 45 35 30 30 10 0 0 45 45 标准色谱图 1-色胺,2-β-苯乙胺,3-腐胺,4-尸胺,5-组胺,6-1,7二氨基庚烷(内标),7-酪胺,8-精胺,9-亚精胺 计算 X = A×f/V×1000 X——试样中生物胺的含量,单位为毫

文档评论(0)

shuwkb + 关注
实名认证
内容提供者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档