3细胞生物学方法课案.ppt

第三章 细胞生物学研究方法;第一节 细胞形态结构的观察方法;一、光学显微镜技术;普通光学显微镜 ;荧光显微镜 ;荧光显微镜照片 微管呈绿色 微丝红色 核蓝色 ;激光共聚焦扫描显微镜 ; 激光共聚焦扫描显微镜用激光作扫描光源，由于激光束的波长较短，光束很细，所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力，大约是普通光学显微镜的3倍。 调焦深度不一样时，就可以获得样品不同深度层次的图像，这些图像信息都储于计算机内，通过计算机分析和模拟，就能显示细胞样品的立体结构。 ;第二节 细胞组分的分析方法;一、超速离心分离细胞器、生物大分子及其复合物;二、特异蛋白的定位、定量与定性;人类染色体端粒DNA的荧光原位杂交 ;四．定量细胞化学分析技术;? 流式细胞仪（Flow Cytometry） ?主要应用： 定量测定细胞中的DNA、RNA或某一特异 蛋白的含量来： 1.测定细胞群体中不同细胞的数量（分类计数功能）； 2. 从细胞群体中分离某些特异染色的细胞（分选功能）。 ;第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术;一、细胞的培养;Hela细胞（左）、CHO细胞（右）的培养;二、细胞工程 ;细胞融合;正常淋巴细胞具有分泌抗体的能力，但不能在体外长期培养，瘤细胞可以在体外长期培养，但不分泌抗体。于是英国人Kohler和Milstein 1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖。;;;细胞工程;第五节 模式生物与功能基因组的研究;一、模式生物;大肠杆菌;线虫;斑马鱼;拟南芥;二、突变体制备技术;基因敲除（gene knockout):删除基因组中某个基因的部分或全部序列，使该基因失活，在DNA水平制备突变体。 方法：酵母—含有同源序列的质粒同源重组。 小鼠----锌指核酸酶 ZFN , TALEN, CRISPR/Cas9,ES打靶 基因敲入（gene knockin):在基因组中特定位置插入某个基因，使之得到表达。;学习要点