药物敏感试验讲述.ppt

抗菌药物敏感试验 细菌室 李巍 抗菌药物敏感试验 什么是抗菌药物的敏感性试验 测定抗菌药物在体外抑制病原微生物生长的效力，称为抗菌药物对细菌的抑制试验，或称为细菌对药物的敏感性试验。 为什么要做药敏试验？ 供医师选用抗菌药物时的参考 细菌耐药性检测和耐药性变迁 评价新抗菌药物的药效学特征 对细菌耐药谱分析和分型有助于某些菌种的鉴定 作为医院内感染流行病学调查的手段之一 如何进行药敏试验 方法学 1. 稀释法 --试管稀释法 --平板稀释法 2. 扩散法（纸片法） 3. E-TEST 4.自动化仪器 几个重要的指标 MIC（最低抑菌浓度） 在体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度 MBC(最低杀菌浓度) 在体外能够使细菌的总数减少或杀灭99.9%以上的最低药物浓度 临界浓度 根据MIC，结合常用剂量时该药所能达到的血药浓度，划定细菌对各种抗菌药物敏感或耐药的界限 如何制备菌悬液？ 如何取菌落？ 为什么至少取3个菌落？ 可能丢失耐药细菌（携带有耐药质粒的耐药菌株） 扩散法：K-B 操作： -制备0.5麦氏度菌液 -无菌棉签蘸取菌液，在管壁将多余菌液旋转挤去，在琼脂表面均匀涂布3次，最后沿着平板内缘涂抹一周 -室温或35度干燥5—10分钟 -将纸片紧贴于表面 -纸片间距20厘米，离平板内缘15厘米 如何阅读结果（纸片法） 工具：游标卡尺、尺子 光源：反射光、透射光 阅读：背衬不反光的黑色背景用肉眼观察，也可用BIOMIC机器阅读 纸片法结果的正确阅读 反射光 不反光的黑色背景 完全抑制的抑菌圈直径，包括纸片的直径 抑菌圈的界限应该是以肉眼观察没有明显的可见细菌生长区域 在抑菌圈边缘微弱生长的、仅能在放大镜下才能观察到的细小菌落应忽略 应注意葡萄球菌、肠球菌的阅读 苯唑西林、利奈唑胺和万古对葡萄球菌的抑制圈 万古霉素对肠球菌的抑制圈 任何有可见的菌落生长均视作对上述抗菌药物耐药 需在透视光下阅读，遇不敏感的结果需用稀释法测MIC确证 应注意磺胺类药物的结果阅读 培养基可能含有拮抗物如胸腺嘧啶、核苷类物质，允许有轻微生长的薄菌苔 忽略20%或更低生长的薄菌苔，测量抑菌圈直径较为明显的细菌生长界限 下列细菌均注意：肠杆科、不动、伯克、葡萄、嗜血、肺链、弧菌属、脑膜炎奈瑟菌 应注意变形杆菌属的阅读 生长呈迁移性 在一些抗菌药物抑菌环可见雾霾样迁徙生长的菌苔 雾霾样生长忽略不计 忽略迁移性 应注意溶血性细菌的结果阅读 链球菌 --β-溶血链球菌 --草绿色链球菌 --肺链 应忽略溶血区，读取生长完全被抑制处 注意产色素细菌的结果阅读 有些细菌在生长的过程中产生色素 --铜绿 --黄杆菌 --沙雷菌 应忽略色素分泌圈，读取生长完全被抑制处 解读注意事项 1、药敏试验是参照美国的CLSI推荐的标准制定的。 2、细菌全自动分析仪的药敏组合是固定的。 3、某些细菌对某类抗生素天然耐药，则不需要做药敏试验。 4、试验的药物代表一类药，而不是一种药。 解读注意事项 5、对葡萄球菌一代比三代头孢治疗效果好。 6、有些药物不适用于单独使用，仅用于联合用药，如利福平。 7、因为是体外药敏试验，有些药体外试验敏感，可能临床治疗无效。 8、同一菌株可能出现亚种，导致连续药敏结果不吻合。 细菌耐药概念 多重耐药（MDR）: 指细菌同时对三种以上结构不同（作用机制不同）抗菌药物耐药，如头孢菌素、喹诺酮类、氨基糖苷类； 泛耐药（ PDR）:细菌对本身敏感的所有药物耐药； 超级细菌:并非科学概念，一般指PDR与部分MDR，没有确切定义，以下细菌属于此列： MRSA/VRSA; VRE; MDR-PA,PDR-AB; ESBL(+)+AmpC(+) 肠杆菌 产碳青霉烯酶肠杆菌（产KPC酶、包括产NDM-1细菌） 与临床沟通中常见问题 1、我们想用的药物在药敏试验中 没有做？ 可能是天然耐药 可能是药物的敏感性被其他药物所预报 与临床沟通中常见问题 2.为什么有的菌报告很多种药物， 有的仅报告几种药物？ 报告的药物种类根据细菌种类的不同而有所不同，如铜绿假单胞菌报告的药物较多，而嗜麦芽窄食单胞菌报告的药敏较少 CLSI药敏建议 与临床沟通中常见问题 3、是否能将所用的药都做药敏试验? 没有必要：通过耐药机制和标志性药物可以预测其他抗菌药物的敏感性 没有可能：不是所用药物都可以做药敏试验（需要药物在体外稳定，需要有操作标准和解释标准） 与临床沟通中常见问题 4、在药敏试验报