药物血浆半衰期的测定讲述.pptx

药物血浆浓度及半衰期测定 药理学教研室 【实验目的】 1.以磺胺嘧啶钠为例学习测定药物半衰期（t1/2）等药动学参数的基本方法。 2.理解常用药动学参数的临床意义 4/7/2017 2 【实验原理】 磺胺类药物为对氨基苯磺酰胺类化合物，在酸性溶液中，可与亚硝酸钠起重氮反应，产生重氮盐。在碱性溶液中，重氮盐可与酚类化合物（麝香草酚）起偶氮反应，形成橙红色的偶氮化合物。可在525nm波长下进行比色测定。根据Beer-Lamber定律，浓度与光密度成正比关系。其化学反应式如下： 4/7/2017 3 【材料与方法】 一、实验动物：家兔1只。 二、器材与药品：试管24只，移液吸管10ml，1只；1ml，2只；2ml 7只；移液器1支，吸头若干，试管夹，试管架，离心机，722型分光光度计，手术剪，眼科剪，止血钳，动脉夹，眼科镊，缝线，药棉，纱布，捆扎绳，注射器10ml 1支，5ml 1支。5%磺胺嘧啶钠溶液，7.5%三氯醋酸溶液，0.5%亚硝酸钠溶液，0.5% 麝香草酚溶液（溶于20％氢氧化钠内），草酸钾结晶，25%氨基甲酸乙酯溶液，肝素注射液。 4/7/2017 4 三、方法与步骤 1.取试管5只，依次用A1、A2、A3……A5标记，各加入7.5%三氯醋酸2ml备用。 2.取试管5只，依次用B1，B2，B3……B5标记，各加入草酸钾结晶几粒(抗凝)。 3.取家兔，称重， 取血方法1： 以乌拉坦(4ml/kg)耳缘静脉注射麻醉，麻醉后将兔背位固定于手术台上，正中切开颈部皮肤，分离一侧颈总动脉，结扎其远心端，并在近心端夹上动脉夹，以阻断血流，再将放血导管向心脏方向插入颈总动脉内，用线打活结固定。 取血方法2：耳缘静脉近心端开始向远心端方向抽血0.5～1ml 4. 耳缘静脉注入3%磺胺嘧啶钠4ml/kg，记录注完时间（准确到分钟）。 5.给药前、给药后5min、10min、20min、30min，松开动脉夹，放血约1ml，分别置于B1 、 B2、B3、B4、B5管，迅速摇匀抗凝，记录取血标本的准确时间。 注意在取血前先要放掉动脉插管内的残血。 4/7/2017 5 4/7/2017 6 动脉取血约1ml 准确移液100μl 7.5%三氯醋酸2ml 混匀 1500转/分离心5min 准确移上清液1.5ml 1.加0.5％亚硝酸钠0.5ml 2.加0.5%麝香草酚1ml 525nm测光密度 A B C 偶氮反应 橙红色 4/7/2017 7 6.然后准确吸取100μl加入相应的各A管, 各管以1500转/分离心5min，分别取离心后的上清液1.5ml，加0.5%亚硝酸钠溶液0.5 ml，摇匀，再加0.5%麝香草酚1ml，可见橙红色反应。以给药前血样作空白对照，用722型分光光度计于525nm波长下进行比色，测定各时间点的光密度，在标准曲线上查得磺胺钠浓度。 C=582D-53 根据吸光度,线性方程 y=582x-53, 计算浓度,求对数值. (Excel – 常用函数 – log10 – 计算对数值. ) 将给药时间t 与已求得的磺胺药血浆浓度对数值做直线回归, 根据一级消除动力学公式: lgCt=lgCo+ (-K/2.303)t 回归方程的斜率(-K/2.303), Excel – 常用函数 – slope斜率 – 计算得(-K/2.303)= -19.6, 计算K, t1/2=0.693/K, Vd=D/Co, Cl=K*Vd; 已知 t , lgCt, 计算Co, 从而计算Vd, Cl 给药后不同时间点的磺胺钠钠浓度 4/7/2017 9 管号 1 2 3 4 5 给药时间 光密度值 磺胺钠浓度 磺胺钠对数浓度 7.计算 根据一级动力学消除公式 t 将给药时间t与已求得的磺胺血浆浓度对数值lg Ct作直线回归，即可得回归方程的斜率（- K /2.303）和截距（lgCo） 4/7/2017 10 4/7/2017 11 应用公式t1/2=0.693/K，Vd=D/Co，CL=K·Vd，便可求得t1/2、Vd和CL。 1.计算器（Casio fx－180或fx－3600p）的操作步骤 ⑴MODE 2 屏幕显示LR，进入线性回归计算状态； ⑵INV AC消除储存器内的全部数据； ⑶XoDo自变量输入； DATA因变量数据输入； ⑷INV A（截距），INV B（斜率） INV r（相关系数）； ⑸INV X得期望值。 4/7/2017 12 2.计算机的操作步骤（以Excel2002为例） 将数据输入Excel中，调用其自带的函数，根据对话框