特殊染色培训解题.ppt

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特 殊 染 色 相关培训;? 一、特殊染色的概念及意义 特殊染色为常规染色(即苏木素、伊红)的必要补充,又称选择性染色,只有相对的特异性,如PAS阴性反应它有糖元。 ;意义: (1)特染能显示在常规染色切片中不明显的部分,如革兰氏染色、细菌染色。 (2)区别HE染色中不能鉴别的组织病变,如VG染色区别胶元纤维和平滑肌。 (3)显示某些常规染色中不能着色的物质,如网染才能显示网状纤维,常规HE染色是染不出来的。 因此,特殊染色也是制片染色中不可缺少的组成部分,它在病理诊断常着辅助作用,也为科研提供依据。 ;二、学习特染技术应掌握的重点 (注意事项) (1)染色方法的成败,应该在温度、浓度、时间和PH值等方面找原因。 (2)注意特染的应用范围,如某种病变应用什么方法染色才能达到目的,一般先在HE切片所见的要求去选择适当的特染方法,一种或多种。 ;(3)必须掌握各种特殊染色的结果,避免导致错误的结论或严重的误诊,如在网染时把胶元纤维误以为网状纤维。 (4)尽量要阳性切片作对照,便于选择特染方法,并与HE切片作对照。 (5)特染的组织,在其固定、脱水根据要求选择。所用的器皿都必须化学清洗。 ;三、玻璃器皿的清洁 在病理实验室可用的玻璃器皿,都必须经过清洗干净才能使用,清洗的方法依玻璃器皿的新旧而不同。;1、新购玻璃器皿的处理 对于新购买的玻璃器皿应先用洗衣粉浸泡洗刷,自来水冲洗后再用1—2%盐酸水溶液浸泡数小时后,用自来水冲洗干净,必要时可用少量蒸馏水洗2次;2、使用后玻璃器皿的处理 每次使用后的玻璃器皿都必须及时彻底清洗干净,以供下次实验之用,如轻视这一步骤,可用的玻璃器皿不够干净,则会影响染色效果,甚至导致染色失败,特别在酶组化和银离子反应操作过程中更有严格的要求,使用后的玻璃器皿在一般清洗后,还要求用硫酸清洗液浸泡。; 硫酸清洗液配制 重铬酸钾 80g 自来水 1000ml 浓硫酸(工业用) 120m 新配制的清洁液为红褐色,反复使用一段时间后,慢慢变成绿色,说明清洁液已失败,不能继续使用应重新配制。; 3、玻璃器皿的清洗方法 ① 任何玻璃器皿都必须用自来水冲洗,然后把残余药液或染液洗去。 ② 用毛刷沾洗衣粉擦干净。 ③ 自来水冲洗,蒸馏水洗2次。 ④ 把晾干的器皿轻轻置入清洁液浸泡数日。 ⑤ 取出器皿,用自来水把器皿内外彻底冲洗干净,最后用蒸馏水洗2次。 ⑥ 把玻璃器皿倒置于有孔架上自然晾干或温箱中烤干,最后存放橱内备用。; ? 常用的特染 第一节 结缔组织染色;一、胶元纤维染色(VG 染色) ㈠ 胶元纤维的分部组成成分 胶原纤维是结缔组织中的三种纤维之一,分布最为广泛,含量最多。主要分布于真皮、腱、韧带、骨、透明软骨、动脉、肠壁 、子宫和基底膜等。胶原纤维具有韧性大,抗拉力强的特点。胶原纤维单位主要由纤维母细胞合成。;? 苦味酸—酸性品红法 1. VG 染液试剂配制 1%酸性品红 10ml 苦味酸饱和液 90ml 此液常分别配制临用时加以混合,不能久用。; 【染色步骤】 (1)组织固定于10%早醛液中,常规脱水包埋 (2)组织切片脱腊至水。 (3)V-G染液2-5’(酸性品红1:苦味酸饱和液9) (4)倾去染液,无水酒精急速脱水,用滤纸吸干 (5)二甲苯透明,中性树胶封片。 ;【结果】 ? 胶元纤维呈红色,肌纤维、胞质及 红细胞黄色。;; ㈡ 胶元纤维染色应用 胶原纤维染色在病理诊断上主要用于鉴定梭形、纤维形细胞肿瘤的组织来源; 常常要在纤维、平滑肌和神经三者之中作出选择。 观察动脉硬化的心脏,在HE切片中,心肌内散在的小疤痕灶和心肌均被染作红色,而作胶原纤维染色可将胶原组织和肌肉上明显地区分开来。 早期肝硬化用胶原纤维染色,也可使小叶之间少量增生的胶原纤维突出地显示出来。;二、 网状纤维染色 ㈠网状纤维染色的形态特点和染色原理 网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维。它由网状细胞产生,网状纤维细而有分支,穿行于细胞体和突之间,共同构成网状支架。这种纤维用HE染色一般不易辨认。若用银氨溶液浸染能使纤维变成黑色,故又称嗜银纤维。;(二)网状纤维染色的原理 网状纤维的染色方法很多,但是染色原理基本相同,有以下方面。 (1)氧化 使网状纤维具有选择性,不经氧化的切片,常用的氧化剂是高锰酸钾。 (2)漂白 一般采用2%草酸,漂白后无色;(3)媒染 多用2%硫酸铁氨(俗称铁明矾)。这些试剂可增

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