水的细菌学检查课案.ppt

水的细菌学检查 生活用水的水源常被生活污水或工业废水或人与动物的粪便所污染。 粪便污物含有不同类型的微生物，有腐生性的和病原性的。 腐生性微生物对人无害，而病原性微生物则能引起传染病的发生。 一、实验目的 1．学习水样细菌总数的测定方法。 2．掌握水中大肠菌群的测定方法。 3．了解大肠菌群的数量与生活饮用水的 重要性。 二、实验原理 （一）细菌总数的测定 水中的细菌总数可反映出水体被有机物污染的程度。细菌总数越多，说明水中有机物的含量就越高。 二、实验原理 （二）水中大肠菌群的测定（多管发酵法） 多管发酵法包括：初发酵试验、平板分离和复发酵试验三部分。 三．实验用品 培养基： （一）牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 （二） 乳糖蛋白胨液体培养基 3倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基 红美蓝琼脂培养基（制成平板） 四、实验操作 （一）细菌总数的测定 1. 水样采集 自来水 将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再拧开水龙头流水5min，以排除管道内积存的死水，随后用已灭菌的三角瓶接取水样，以供检测。 池水、河水或湖水 将无菌的带玻塞的小口瓶浸入距水面10～15cm深的水层中，瓶口朝上，除去瓶塞，待水流入瓶中装满后，盖好瓶塞，取出后立即进行检测，或临时存于冰箱，但不能超过24h。 水样稀释 取1ml水样加入到9ml无菌水的试管，振荡混匀，得稀释度为10－1； 从10－1管中取水样1ml加到第二支9ml无菌水的管中，振荡混匀，得10－2…… 四、实验操作 （二）多管发酵法测定水中的大肠菌群 1. 水样采集 2. 自来水检查 （1）初（步）发酵试验 （2）平板分离 （3）复发酵试验 四、实验操作 （二）多管发酵法测定水中的大肠杆菌 1. 水样采集 2.池塘水、河水或湖水等的检查 （1）将水样稀释成10-1 与10-2 。 （2）吸取稀释后水样 。 五、实验结果 池水、河水或湖水阳性结果记“＋”；阴性结果记“－”。 查表2-14得每升水样中大肠菌群数是多少？ 表2－14 大肠菌群检索表接种水样量111.1ml（100+10+1+0.1） 六、思考题 你所测的池塘水、河水或湖水的污秽程度如何?通过实验你对保护水源水有何看法？ 大肠菌群的定义是什么？ 假如水中有大量的致病菌——霍乱弧菌，用多管发酵技术检查大肠菌群，能否得到阴性结果？为什么？ EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？ 经检查，水样是否合乎饮用标准？ 表2-13 大肠菌群检数表 100mL水量的阳性管数 10mL水量的阳性管数 O l 2 每升水样中 大肠菌群数 每升水样中 大肠菌群数 每升水样中 大肠菌群数 0 3 4 l l 1 3 8 18 2 7 13 27 3 11 18 38 4 14 24 52 5 l8 30 70 6 22 36 92 7 27 43 120 8 3l 51 16l 9 36 60 230 10 40 69 230 （水样100ml*2＋10ml*10） 分别吸取1mLl0-2、10-1的稀释水样和1mL原水样，各注入装有10mL普通浓度乳糖蛋白胨发酵管中。另取10mL和100mL原水样，分别注入装有5mL和50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管（瓶）中。 （3）平板分离和复发酵试验。 … … … … … 23 － － － ＋ 22 － ＋ ＋ － 19 ＋ － ＋ － 18 ＋ ＋ － － 9.5 － － ＋ － 9 － ＋ － － 9 ＋ － － － 9 － － － － 0.1 1 10 100 每升水样中大肠菌群数 接种水样量\ml 三倍浓缩乳糖蛋白胨50、5ml 普通浓缩乳糖蛋白胨10、10ml * 水源水如湖水、河水、池水和溪水，常含有很多腐生菌，但仍可安全地饮用。 水源一旦被粪便污染，就可能也被肠道病原体污染而引起肠道传染病甚至流行病，如霍乱、伤寒、细菌性痢疾和阿米巴性痢疾以及脊髓灰质炎和传染性肝炎等病毒性疾病。 因此必须对生活用水及其水源水进行严格的细菌学检查。 测定水样是否合乎饮用标准，通常包括下列两个项目： 细菌总数测定 大肠菌群的测定 细菌总数测定 水中细菌总数可说明被有机物污染的程度。细菌数越多，有机物质含量越大。 细菌总数是指1ml水样在普通琼脂培养基中，37℃经24 h培养后，所生长的菌落数。 我国规定自来水1ml的总菌数不得超过100个。 大肠菌群的