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王迪; 主 要 内 容;实验分组及材料;原 理;有丝分裂原;;;形态学检测方法;3H-TdR掺入法;MTT法;活/增殖
期的细胞;操作流程;;实验步骤;实验步骤;细胞培养
按图所示加板。
将板做好标记,在倒置显微镜下观察细胞,然后放于37℃ 5%CO2培养箱中,培养48小时。
MTT掺入:
在终止培养前2小时,在显微镜下观察细胞转化情况。
每孔内加入MTT(5mg/ml) 20ul,加完后轻轻搕板,使MTT和细胞混匀。
在37℃ 5%CO2培养箱中继续培养2小时,取出板,观察颜色变化,然后离心2000rpm,10min,轻轻吸去上清,注意不要将孔底部的颗粒物吸出)观察板底是否有蓝色的颗粒。
加入100ul 二甲亚砜(DMSO),轻轻晃板,将颗粒完全溶解。
结果测定:
结果测量:用酶标仪测定490nm处光密度值(OD490nm),记录结果。
结果判定: SI(刺激指数)=ConA刺激孔值 /对照孔值;ConA的倍比稀释;1;结 果 处 理;Excel 作图
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