非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法详解.doc

湖南湘大兽药有限公司工作标准文件 题 目 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法标准操作规程 编 号 ZLJGF-046-00 修 定 质检部 审 核 批 准 修定日期 2016.12 审核日期 批准日期 颁发部门 GMP办公室 颁发数量 2 份 生效日期 分发部门 质检部、档案室 文件页数 共11页 一、目的：为规定非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法的检测方法和操作要求，特制定本操作规程。 二、引用标准：中华人民共和国兽药典（2015年版 一部 附录P179）。 三、适用范围：适用于本公司检品采用非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法的质量检测。 四、责任者：理化分析员对本标准的实施负责。 五、正文： 1简述： 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。 如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物无毒性。 供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。 2.计数方法 计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（Most-Probable-Number Method，简称MPN 法）。MPN 法用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，MPN 法可能是更适合的方法。 供试品检查时,应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。所选方法的适用性须经确认。 3.计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。 供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。 若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。 表 1 试验菌液的制备和使用 试验菌株 试验菌液的制备 计数培养基适用性检查 计数方法适用性试验 需氧菌总数计数 霉菌和酵母菌总数计数 需氧菌总数计数 霉菌和酵母菌总数计数 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B)26 003)〕 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30 ～35℃，培养时间18～24 小时 胰酪大豆胨琼脂培养基和胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30 ～35℃，培养时间不超过3 天，接种量不大于100cfu 　 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基 （ MPN法），培养温度30 ～35℃，培养时间不超过3 天，接种量不大于100cfu 　 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa） 〔CMCC（B）10 104〕 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30 ～35℃，培养时间18～24 小时 胰酪大豆胨琼脂培养基和胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30 ～35℃，培养时间不超过3 天，接种量不大于100cfu 　 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基 （ MPN法），培养温度30 ～35℃，培养时间不超过3 天，接种量不大于100cfu 　 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)〔CMCC(B) 63 501〕 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30 ～35℃，培养时间18～24 小时 胰酪大豆胨琼脂培养基和胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30 ～35℃，培养时间不超过3 天，接种量不大于100cfu 　 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基 （ MPN法），培养温度30 ～35℃，培养时间不超过3 天，接种量不大于100cfu 　 白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕 沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基，培养温度20 ～25℃，培养时间2～3天 胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30 ～35℃，培养时间不超过5 天，接种量不大于100cfu 沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度 20～25℃，培养时间不超过5 天，接种量不大于100cfu 胰酪大豆胨琼脂培养基（ MPN 法不适用），培养温度30～35℃，培养时间不超过5 天，接种量不大于100cfu 沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度 20～25℃，培养时间不超过5 天，接种量不大于100cfu 黑曲霉(Aspergill