东南大学1-6-5 分子生物学.doc

●基因是DNA 或 RNA 分子中有特定遗传功能的一段序列。 是能够表达和产生基因产物（蛋白质或RNA）的核苷酸序列。其内容可扩展至包括两侧对基因表达的起始和终止所必需的调控序列。 ●顺式作用元件:(cis-acting element)是能影响基因表达，但不编码RNA和 蛋白质的DNA序列。包括启动子和上游启动子元件、反应元件、增强子Poly(A)、加尾信号 ●反式作用因子 (trans-acting factor)指能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的蛋白质。 ●启动子（promoter）是RNA聚合酶特异性识别结合和启动转录的DNA序列。有方向性，位于转录起始位点上游。 ●增强子（enhancer）能与反式作用因子结合，增强转录活性，在基因任意位置都有效、无方向性。 ●C 值是一种生物单倍体基因组 DNA 的总量。 真核细胞基因组的最大特点是它含有大量的重复序列，而且功能 DNA 序列大多被不编码蛋白的 DNA 所隔开。这就是 C 值反常现象。 ●DNA 的转座是由可移位因子介导的遗传物质重排现象。根据转座作用机制的不同，可分为复制性转座和非复制性转座。 ●端粒酶是一种核糖核酸蛋白酶，由 RNA 和蛋白质构成，具逆转录活性，能够以自身的RNA 为模版，通过多次互补配对，延长染色体端粒 3’末端。 ●转座成分（transposable elements）又称移动基因（movable genes），或称为跳跃基因（jumping genes）。指一些可以在染色体基因组上从一个位置转移到另一个位置，甚至在不同染色体之间跃迁的 DNA 成分。 ●转座是在转座酶的作用下，转座因子或是直接从原来位置上切离下来，然后插入新的位置，或是染色体上的 DNA 序列转录成 RNA，随后反转录为 cDNA，再插入染色体上新的位置。 ●端粒的功能 人体细胞端粒长度约为 5～15 Kb，其功能在于保护染色体免受核酶降解，防止断端、融合、重排或降解。 如果端粒长度缩短到极限如4 Kb以下时，细胞则会丧失分裂增殖能力而发生凋亡。 端粒缩短被认为是正常细胞分裂与老化的分子信号，端粒被称为细胞寿命的“分裂钟”。 ●端粒酶是依赖RNA的 DNA聚合酶，实质是一种逆转录酶。 能识别特定的端粒重复序列，以自身 RNA的部分序列(5’-CUAACCCUAAC-3’)为模板，合成新的端粒重复序列，使端粒延长，保持染色体的完整。 ●原核生物基因表达调控主要在转录水平，其次是翻译水平。原核生物基因表达调控主要在转录水平，即对RNA合成的调控。通常有两种方式： (1) 起始调控，即启动子调控，(2) 终止调控(衰减子调控) ●转录的选择性：在细胞周期的某个阶段，或不同类型的细胞中，某些特定的基因被转录，而多数其它基因处于封闭状态，即转录有时间和空间上的严格调控。 ●核酸的凝胶电泳指按分子量大小分离DNA的凝胶电泳技术，分为琼脂糖(agarose)凝胶和聚丙烯酰胺(polyacrylamide) 凝胶，是分析鉴定重组DNA分子及蛋白质与核酸相互作用的重要实验手段。 ●印迹技术是 利用各种物理方法使电泳中的生物大分子转移到硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane, NC)等各种膜上，使之成为固相化分子。 ●Southern 印迹杂交 (Southern blotting) 是将电泳分离的待测 DNA片段结合到一定的固相支持物上，然后与存在于液相中标记的核酸探针进行杂交的过程。用于DNA定性、定量分析。 ●PCR 技术是体外快速扩增特定基因或 DNA 序列最常用的方法。 整个反应包括 DNA解链 （变性）、引物与模板结合（退火）、DNA合成（延伸）三步，此三步可以被不断重复。经多次循环之后，反应混合物中所含有的双链 DNA 分子数，理论上的最高值应是 2n。 ●SNP（单核苷酸多态性） 指基因组 DNA 序列中由于单个核苷酸（A，T，C 和 G）的突变而引起的多态性。 ●基因敲除（gene knock-out）又称基因打靶，通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点。完全基因敲除 指通过同源重组法完全消除细胞或者动物个体中的靶基因活性。 条件型基因敲除 指通过定位重组系统实现特定时间和空间的基因敲除。 ●基因敲除意义 ① 研究基因功能 ② 转基因动物的制备 ③ 用于药物筛选的动物模型 ④ 转基因动物可作为“生物反应器”生产药物 ●基因工程载体的选择标准 能自主复制； 具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定； 有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切