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第二节 蛋白质的越膜运输 一. 蛋白质的定位装置 蛋白分检（Protin sorting） 蛋白质的运输（trafficking） 二. 导肽(（Leader sequence）) 核糖体可分为游离的和膜结合的两类 翻译后转运（post-translation translocation） 共翻译转运（co-translatonal rtanslocation） 信号肽(signal sequence) 整合膜蛋白（integral membrane protein） 三．导肽的结构和功能 导肽通常是疏水的，～20aa 由非电负性氨基酸构成，中间夹有碱性氨基酸，而没有酸性氨基酸，羟基氨基酸含量高 易形成双亲?螺旋轮（amphiphilic helix）; 不同的前导顺序缺乏同源性，意味什么？ 这意味着和识别有关的信号不是一极结构的序列，而是氨基酸的性质。 四．导肽在线粒体叶绿体中决定蛋白位 (一) 线粒体的蛋白转运 基质导向信号（matrix-targeting signal） 膜导向信号（membrane-targeting sigmal） (二) 叶绿体蛋白的转运 基质（stroma） 类囊膜（thylakoid membrane） 腔（lumen） (三)核蛋白的转运 输入和输出 (基质) （类囊体） 五．信号肽的结构和功能 (一)信号假设的建立 1972年Milstein等发现IgG 轻链前体比成熟的Ig N-端多20 aa 美国Bloble完成三项实验支持了以上推测：（1）将IgG的mRNA在无细胞系统中，以游离核糖体在体外合成的是IgG前体；若在无细胞系统中加入狗胰细胞的RER，就能产生IgG成熟蛋白。成熟的IgG轻链蛋白和前体蛋白相差疏水性20aa，说明什么？ （2）加入蛋白水解酶不能使正在合成的IgG水解，而同时加入去垢剂就可以使其水解。此表明什么? （3）用去垢处理骨髓瘤后所获得的多核糖体与膜分离，然后在离体的条件下继续进行新生肽的合成。经短时温育得到的是成熟的IgG，而长时温育得到的是前体IgG，此表明什么? 5’ 3’ SRP 7S RNA的两个功能域 细菌中蛋白质的越膜转运 核蛋白的转运 入境： Histones Nonhistones Ribosomal proteis (核蛋白体蛋白) 出境： Ribosomal subunit mRNA 出入核的多种途径1.自由途径2.渗透途径3.信号途径 核定位信号 帽接合复合体 核输出信号 具有输出和输入信号的蛋白 载体 载体 载体蛋白和底物结合，带底物穿过核孔，然后返回核中，循环使用。 核定位信号 多形瘤 T 抗原 核定位信号（NLS）具有碱性的残基 [卵]核质蛋白 NLS的特点： 1.无保守序列； 2.有一段短的碱性氨基酸序列； 3.常存在Pro,可抑制碱性氨基酸的上游形 成?螺旋； 4.有的NLS有两个分开的短的簇 5.所有的NLS序列都可被“入境”系统所识别。 “入境”分二步： 停泊，移位 ? ? ? ? ? ? 转位的成分 核蛋白 核孔 胞质成分 入境蛋白 核相关蛋白-GTP 核孔 停泊 入境蛋白-?结合核蛋白 入境蛋白-?结合底物 移位 核孔 GTP和Ran的结合状态控制核蛋白是“进”还是“出” Nuclear export signal Nuclear localization signal 从核转移到胞质中的蛋白的共同特点是存在一NES(~10aa的信号) 一个亚基上的NES可使另一个蛋白从核中转运出 带有一个NES的蛋白可使一个RNA从核中转运出 cAMP依赖性蛋白激酶