酶学技术2016讲述.ppt

第五章　 酶学分析技术 1 2 简介内容： 一、酶的基础知识 二、酶含量的表示方法 三、酶促反应动力学 四、酶促反应进程 第一节 酶学分析技术基本知识 3 一、酶的基础知识 4 高效性、高度特异性、高度不稳定性、可调节性 酶的应用： 酶（enzyme）：由活细胞产生的能高效催化特异生化反应的蛋白质，属于生物催化剂 酶的催化特点： 酶活性/含量的检测、代谢物的酶学分析和同工酶及亚型测定用于临床诊断和疗效判断。 酶的组成和命名 由于酶的特异性强，催化反应的速度快，反应条件温和等，因此酶试剂一般化学试剂，具有更高的特异性和灵敏度，更易于自动化，可为临床更加及时地提供准确的检验信息。 胰蛋白水解酶 5 二、酶含量的表示方法 酶测定标本及方法类型 标本：　 　　　组织细胞 　　　体液：以血浆或血清为主 测定方法： 　　　 酶质量测定：绝对质量，以g/L为表示单位　 　　　　　　　　　　　　　　　 酶活性测定：相对质量，以U/L为表示单位　 7 (一)、酶活性浓度表示方法 酶活性（enzyme activity）也称为酶活力，指酶促反应速率，即规定条件下在单位时间内产物的生成量或底物的减少量。 表示方法： 　或　 式中v：反应速率，[P ]：产物浓度，t：时间，[S]：底物浓度。 8 酶活性单位 定义：表示酶的相对含量，指在一定条件下，单位时间内 生成一定量的产物或消耗一定量的底物所催化的酶量。 表示方法： 惯用单位（一定的反应量/一定的反应时间） 国际单位IU（μmol/min） Katal单位（mol/s） 9 1．惯用单位： 20世纪60年代以前根据酶活性测定方法建立者的姓氏命名的单位 ALP的金氏单位（King） 氨基移转酶的卡门氏单位（Karmen） 特点：各单位对温度、时间、物质量的定义不同，导致各测定值、参考范围相差很大，彼此间无法比较,现在临床应用较少。 卡门氏单位：1.0ml血清在25℃，340nm，反应体积3.0ml,光径1.0cm时每分钟测定吸光度下降0.001，即消耗4.82 ? 10-4μmol NADH为一个卡门氏单位 举例： 金氏单位：100ml血清ALP在37℃与底物作用15min，产生1mg酚。 10 2.国际单位IU（μmol/min） 定义：在规定条件下（25℃及其他最适条件），每min催化1μmol 底物转变为产物的酶量，为1IU或1U，1IU=1μmol/min。 IFCC,2001年 37℃ 3．Katal单位 定义：1Katal是在规定条件下，每秒钟催化1mol底物转变为产物的 酶量。1Katal＝1mol/s。 IU与Katal单位的关系：1katal = 60×106IU，1IU = 16.67nkatal 国际单位IU 25℃ 单位U 37℃ 11 酶活性浓度 酶活性浓度指单位体积样本中的酶活性单位。国际单位用IU/L或U/L表示。酶活性浓度才具有临床可比性，但其多数情况下都被不严格地称为酶活性单位乃至酶活性. 计算公式: 产物的增加量 每单位规定的保温时间 1000（ml） 酶单位/升 = —————————×——————————×———————— 每单位规定的产物增加量 实际保温时间 实际标本用量（ml） 分光光度法测定的公式： （A测定 – A对照）·V总·106 每单位规定的保温时间 酶单位/升 = —————————×———————— ?·L·V标 实际保温时间 正常上限升高倍数（ULN） 概念：某标本酶活性测得的结果除以该法正常参考范围上限所得倍数。 即ULN＝ 酶活性实测值 正常参考范围上限 例：如某人血ALT测定结果为80u/L，该测定方法正常参考范围上限为40mmol/L，其ULN＝80/40＝2 原理：用免疫学技术直接测定酶的质量，以质量浓度单位报告结果。如ng/ml或μg/L等。 优点： 　　　1、灵敏度高； 　　　2、特异性高 　　　3、无活性酶蛋白测定 　　　4、适于同工酶测定 不足： 　　　1、抗体难以制备；2、方法繁杂；3、测定成本高 (二)、酶质量浓度表示方法 15 三、酶促反应动力学 16 研究内容：(初速度,单因素) 研究酶促反应的速率及其各种影响因素（如底物浓度、酶活性浓度、温度、pH、激活剂和抑制剂等）的科学 。 指导选择底物种类、确定底物浓度，确定最适温度、最 适pH、激活剂和抑制剂类型与含量等，从而准确测定酶活性 或代谢物浓度。 研究意义: (一)、酶促反应机制