放射示踪及自显影精要.ppt

放射性核素标记化合物; 1、放射性浓度(radioactive concentration)：指单位体积的溶液中所含有的放射性活度。以Bq/L或Bq/ml等表示。 2、放射化学纯度(radiochemical purity)：指所指定（规定化学形式）的放射性标记化合物的放射性活度占该样品的总放射性活度的百分比。要求放化纯度要达到95%以上。 放化纯度(%)=(标记物的放射性活度)/(样品总的放射性活度)×100%。 4、放射性核素纯度：是指特定的放射性核素的放射性活度占总放射性活度的百分比。 放射性核纯度(%)=(特定放射性核素的活度)/(样品的总放射性活度)×100% 一般要求放射性核素纯度要达到99%以上。 5、化学纯度(chemical purity)：指某一化学形式存在的物质量在该样品的总重量中所占的百分比。;同位素标记与非同位素标记 1、同位素标记(isotopic labeling)：指化合物中的某一稳定核素被其放射性同位素置换。比如用3H取代化合物分子中的1H。 2、非同位素标记(non-isotopic labeling)：采用并非原化合物所含元素的放射性核素进行标记而称之。如蛋白质用131I或125I标记，所得标记物与原来化合物不完全相同。 ;定位标记与非定位标记 1、定位标记(specific labeling)：指标记原子标记在化合物的指定位置上，以符号“S”表示。例如1(S)- 14C-醋酸，表示14C标记在醋酸羧基碳上，即CH3 14COOH。 2、非定位标记(non-specific labeling)：指标记原子可标记在化合物分子的任意部位上。它又可分为均匀标记和全标记。 均匀标记(uniform labeling)是指放射性原子均匀地分布于分子中，以“U”表示。 全标记(general labeling)是指放射性核素的原子随机地无严格定位地分布于被标记化合物分子结构上，以“G”表示，又称普通标记。如氚标记化合物，标记分子中的所有氢原子都可被取代，但机率各不相同。如G-3H-胆固醇。 双标记及多标记(double labeling and multiple labeling) 指在化合物分子的不同部位，引入二种或二种以上元素的同位素原子(如3H、14C)或引入一种元素的两种或两种以上同位素原子。双标记及多标记在同一机体或离体组织中可以同时观察两个指标。 ;放射性核素的选择 1、适宜的T1/2；根据实验目的和实验设计选用合适的物理半衰期 2、射线种类：一般都选γ射线，其次是β射线，α极少用； 3、合适的能量：体内示踪宜选用中等能量γ射线，体外示踪无特别要求； 4、稳定性要好，不脱标，不发生严重的辐射自分解； 5、其它：要求标记容易，价格可以接受，对产生射线的防护容易 ;放射性核素标记化合物的制备 1、同位素交换法：将需要标记的化合物AX和放射性化合物BX*在一定的条件下混合，X与X*之间发生交换反应生成标记化合物AX*，反应式如下： AX+BX*＝AX*+BX 如125I-邻碘马尿酸钠 2、化学合成法：以简单的放射化合物作原料，通过一定的化学反应后，把放射性原子结合在指定的位置上，得到所需要的，带放射性的化合物。该法是放射标记化合物制备的主要方法。 ?;3、生物合成法：是将简单的放射性化合物在体内或体外置于生物(动植物或微生物)生长的环境中，利用生物体在代谢过程中对它的吸收利用而制得某些标记化合物。它又分为全生物合成与酶促合成两种方法。 (1)全生物合成：常采用细菌、绿藻、酵母等低等生物来进行，这些低等生物很容易在实验室内培育，且代谢活泼，繁殖迅速，因而制备效率高，成本很低。 (2)酶促合成：可使用纯酶，酶制剂或含有酶的组织促进合成反应，也可以看作是应用 4、络（螯）合物生成法：根据金属离子生成络合物原理，将放射性金属离子和特定功能化合物进行络合反应，标记快速、定量、简便。 ;;碘标记方法： (一) 125I标记蛋白和多肽 1、氯胺-T法：氯胺T(N-氯代对甲苯磺酰胺钠盐)是一种氧化剂 使放射性Na I溶液中的I-氧化成 I2，然后取代酪氨酸残基芳香环上的氢。 2 、乳过氧化物酶法：过氧化物酶催化过氧化氢生成氧气，氧化I-成 (I2)，然后取代酪氨酸残基芳香环上的氢。 3、固相氧化法：将氧化物（Iodogen）或过氧化物酶制成固体颗粒或交联在固体支持物上进行液-固氧化反应。 4、联接标记： 将125I标记在活泼试剂（含酰基化合物）上，后通过（酰基与蛋白或多肽的游离氨基）缩合反应制成。 （二）同位