颅内感染的实验室诊断技术新进展讲述.ppt

颅内感染的实验室诊断技术新进展 1.1 巢式PCR （Nested PCR） 本法需设计引物两套，对脑脊液进行两步法基因扩增，检测其中含量低的病原体。巢式PCR对革兰染色、培养或抗原检测阴性或不确定时更有检测价值。 Takahashi等用巢式PCR检测脑脊液中含量甚微的结核分枝杆菌，较传统的PCR方法敏感度高出1000～10000倍。 Failane等对疑有BCNI的儿童脑脊液应用半巢式PCR检测脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和流感嗜血杆菌，阳性和阴性预测值均为90%以上。 Takahashi T, Nakayama T, Tamura M, et al. Nested polymerose chain reaction for assessing the clinical course of tuberculous. meningitis[J]Neurology,2005,64(10):1789-1793. Failane L, Wagner M, Chesky M, et al. Simultaneous detection of nisseria meningitidis, haemophihts influenzae and Streptococcussp. by polymerase chain reaction for the diagnosis of bacterial meningitis[J]. Arq Neuropsiquiatr,2005,63(4):920-924. 1.2 荧光定量PCR （Real-Time Quantitative PCR RT-PCR） RT-PCR是常规PCR基础上加入荧光探针，具有准确性高、重复性好等特点，已广泛用于基因表达、病原体检测等领域。 应用RT-PCR检测细菌性脑膜炎的病原菌，阳性检出率(39%)显著高于脑脊液培养(10%)。 Brajon G,Mandas D,Liciardi M,et a1.Development and field testing of a real--time PCR assay for caprine arthritis-encephaliis-Virus(CAEV)EJ3[J].Open Virol J,2012,6(1):82-90． Chiba N, Murayama SY, Morozumi M,et al. Rapid detection of eight causative pathogens for the diagnosis of bacterial meningitis by realtime PCR[J]. J Infect Chemother,2009,15(2):92-98. 应用RT-PCR检测脑脊液中肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌敏感性和特异性分别达95.7%和94.3%，且不受抗菌药物应用影响。 研究表明，RT-PCR的检测周期平均比传统PCR短24小时，有助于快速诊断，缩短患者住院时间并减少住院费用。 Wu HM, Cordeiro SM, Harcourt BH, et al. Accuracy of real-time PCR, Gram stain and culture for Streptococcus pnemoniae, Neisseria meningitis and Haemoplilus influenzae meningitis diagnosis[J]. BMC infections Diseases,2013,13(4):26-35. DaheeJin, MD, Tae Hoon Heo, MD, Jung Hye Byeon. Analysis of clinical information and reverse transcriptase-polymerase chain reaction for early diagnosis of enteroviral meningitis[J]. Korean J Pediatr 2015;58(11):446-450. 1.3 基于16SrRNA基因序列分析技术 16SrRNA基因核苷酸序列具有高度保守性，存在于所有细菌的染色体基因组中，其在保守区之间有9～10个变异区，利用16SrRNA可变区与恒定区的特性，设计细菌通用引物，能对临床分离的任何病原菌进行准确鉴定和定位及不同种属细菌的分类，较传统的细菌培养有更高敏感性。 应用16SrRNA基因扩增技术设计快速检测颅内感染常见病原菌的检测方法，能准确、快速且高效地检测脑脊液中病原菌。 高通量测序技术与16SrRNA基因检测相结合，可以大幅度提高病原体检测速度并