食品微生物8微生物分离、纯化与保藏技术讲述.ppt

8 微生物分离、纯化与保藏技术 8.1 微生物菌种的分离纯化 模块二：微生物检验基础技能训练 食品微生物 （1）学习并掌握微生物分离纯化的原理和分离纯化的技术。 （2）学习从样品中分离、纯化出所需菌株。 第一节 微生物菌种的分离纯化 一、实训目的： 微生物分离、纯化与保藏技术 二、实训原理 分离纯化技术是微生物学中重要的基本技术之一。 分离纯化：从混杂的微生物群体中获得单一菌株纯培养的方法。 纯种（纯培养）：一株菌种或一个培养物中所有的细胞或孢子都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。 微生物的分离与纯化技术的应用：分离具有特殊功能的微生物、优良菌种及纯化被污染的菌种等。 微生物菌种的分离纯化 三、实验材料 样品： 细菌：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌 放线菌：细黄链霉素 酵母菌：啤酒酵母 霉菌;黑曲霉 培养基：普通琼脂斜面和平板，营养肉汤 仪器与用具：接种环、接种针、试管架、酒精灯、记号笔、标签、火柴、灭菌培养皿、无菌水、菌种等。 微生物菌种的分离纯化 取样 制备稀释液 分离 四、实训方法与步骤 微生物菌种的分离纯化 1、倾注平板法 分离： 微生物菌种的分离纯化 2、涂布分离法 分离： 微生物菌种的分离纯化 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法 1) 倒平板，标记培养基名称，编号和实验日期。 2）划线方法 3、平板划线法 微生物菌种的分离纯化 利用选择培养基 创造只让所需微生物生长的条件，所需微生物有效地与其他微生物竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。 所创造的条件包括选择最适的碳源、能源、温度、光、pH、渗透压和氢受体等。经过多次重复移种，最后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。 如分离专性寄生菌，须把样品接种到相应敏感宿主细胞群中，使其大量生长。多次重复移种便可得到纯的寄生菌。 4、富集分离法 微生物菌种的分离纯化 利用装原培养基的试管作培养容器，在沸水浴中加热数分钟，逐出培养基中的溶解氧。快速冷却，并进行接种。 加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。或在接种后，用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上试管口密封。 为了更有效地分离某些厌氧菌，可把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。 ５、厌氧法 微生物菌种的分离纯化 五、实训结果 第一节 微生物菌种的分离纯化 （一）菌落观察 菌落 大小 形状 表面 边缘 湿润度 透明度 色素 菌名 菌落1 ? ? ? ? ? ? ? 菌落2 ? ? ? ? ? ? ? 菌落3 菌落4 菌落5 1、微生物菌落特征 1）肉眼观察 2）细致区分还要用显微镜，观察细菌形态。 微生物常规鉴定、筛选 2、微生物生理生化反应 第二节 微生物常规鉴定、筛选 1）营养要求：采用选择培养基 2）酶：产酶种类和反应特性 3）代谢产物：种类，产量，显色反应等 （二）微生物常规鉴定 思考与讨论 微生物菌种的分离纯化 1．如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养？ 2. 接种环（针）接种前后烧灼的目的是什么？为什么在接种前一定要将其冷却？如何判断烧灼过的接种环已冷却？ 广东食品药品职业学院 食品科学系 8 微生物分离、纯化与保藏技术 8.2 微生物菌种的保藏 模块二：微生物检验基础技能训练 菌种的保藏与菌种管理 菌种退化：菌种在自发突变的影响下，引起某些优良特性降低或丧失的现象。 生长速度缓慢，产孢子越来越少； 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降； 菌种衰退原因：基因突变 一、菌种退化 菌种保藏与复壮工作:为菌种创造良好条件，减缓菌种衰退 菌种退化：菌种在自发突变的影响下，引起某些优良特性降低或丧失的现象。 菌种衰退原因：基因突变 一、菌种退化 菌落和细胞形态的改变； 生长速度缓慢，产孢子越来越少； 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降； 菌种保藏与复壮工作:为菌种创造良好条件，减缓菌种衰退 菌种的保藏与菌种管理 二、菌种的复壮 (一)菌种的提纯 (二)通过寄主体进行复壮 (三)淘汰已衰退的个体 菌种的保藏与菌种管理 (一)菌种的提纯 从已衰退的菌种中，通过分离纯化，将尚未退化的个体分离出来，以恢复和建立具有原来生产性状的群体，继续供科研及生产使用。 菌种提纯： 只要求达到菌落纯化的水平，通过稀释平板法、划线法、表面涂血法等常规操作法，适用于退化不太严重的情况。 要求达到“细胞纯”的水平，采用单胞分离法，也可二者结合，先用前一种方法获得较纯的菌种后再采用单胞分离法进一步纯化。 菌种的保藏与菌种管理 (二)通过寄主体进行复壮 对于寄生性微生物如苏云金杆菌、白僵菌、多角体病毒等，由于长期