食用菌母种制作-实验一讲述.doc

实验一 食用菌母种制作 一、目的要求： 1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理； 2、掌握母种培养基的制备方法； 3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。 4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤； 5、熟练分离出栽培用菌种。 二、主要仪器设备及药品材料： 灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管（18x180mm）、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。 三、实验步骤与方法: ①培养基的制作 1 PDA培养基配方 马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升. 2. 母种培养基的配制 (1)熬制。马铃薯洗净，挖芽去皮。称取200克，切成玉米大小颗粒或薄片。量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。四层纱布过滤于量杯中。滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。补足水量至1000毫升。 (2)分装试管。将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。培养基高度为试管长度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。分装完成后，盖紧硅胶塞。 （3）捆把。7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。贴上标签，准备灭菌。 （4）灭菌。注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。 （5）摆斜面，培养基长度约为试管长度的1/2。斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。 ①菌种分离与培养 （1）种菇选择。选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿内备用。 （2）母种分离（组织分离法）。在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台内将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。将分离的试管放在室内避光培养7-8天，检查菌丝生长情况。 四、实验结果 每人制作平菇母种一支。记录母种菌丝的生长情况。 五、作业 1.食用菌菌种分离有哪些方法？实际生产中最常用的方法是哪一种？该方法有何优点？ 2.组织分离法制作母种成功的关键是什么？在操作中如何避免母种制作失败？ 实验二 食用及药用菌原种制作技术 目的要求： 1、了解原种培养基的配制原理及过程； 2、掌握玉米粒原种的制作方法。 重点与难点: 重点: 母种培养基制作过程; 无菌操作; 食用菌组织分离法制作菌种. 难点: 食用菌组织分离法制作菌种. 教学方法与手段: 本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教学。 实验内容: 1、按比例计算、称取各组分； 2、添加、混合均匀各组分； 3、培养料水分、pH调节、装袋； 4、原种培养基灭菌； 5、转接、培养原种。 6、原种质量检查 主要仪器设备药品材料： 灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种铲、原种瓶、橡皮筋、塑料环、高锰酸钾、甲醛、5%石炭酸、75%酒精、平菇母种。 实验步骤 一． 原种培养基的制备 1. 选定配方。玉米97%，碳酸钙2%，石膏粉1%，PH6.5-7.0。 2. 培养基配制。选择无病虫害的的玉米粒，用清水冲洗干净，浸泡40小时左右。加水超过玉米粒表面，煮开锅后，小火再煮5-30分钟，使玉米粒充分煮透（胀而不破，切开后无白心）。用清水冲洗冷却，淋去谷粒表面水份。加入碳酸钙和石膏粉，充分搅拌均匀备用。 3. 装瓶封口。将配制好的培养基装入原种瓶中。将玉米粒培养基装至低于瓶肩处。做到培养基均匀一致，松紧适度，料面平整，擦净瓶口内外壁。塞上棉塞，外面用一层牛皮纸包好。 4. 灭菌。分装好的原种瓶在当天灭菌，避免培养基发霉变质。采用高压蒸汽灭菌。灭菌压力1.4-1.5Kg/cm2。灭菌时间为1.5-2小时。冷却至30℃以下待用。 二． 接种 1. 超净工作台消毒灭菌。将灭菌后的原种瓶及接种用的所有用具（酒精灯，接种铲等）放入接种场所，进行消毒灭菌。 2. 接种。将平菇母种试管外壁表面消毒后放入超净工作台中。点燃酒精灯，用酒精棉球再次对试管外壁表面消毒，特别是管口处，去下棉塞后，试管口在火焰上烤一下，然后用经火焰灭菌并已冰凉的接种铲将母种斜面分成4-6份，将其固定在接种架上，注意管口始终在酒精灯火焰形成的无菌区内（管口离火焰1-2厘米）。然后左手持原种瓶，右手取下棉塞，瓶口在火焰上烤一下，用接种铲取一份母种迅速准确的放入料瓶内的接种穴处，棉塞过火后塞好，包上包头纸。如此反复，每支母种可扩接原种4-6瓶。 三． 培养。 将接种后的原种瓶放入消毒过的培养室培养，培养温度为25℃。定期检查杂菌发生情况，从培养3-5天开始每天检查一次，当菌丝封住料面并向下深入1-2厘米时，可改为每周检查一次，发现