高效液相色谱仪使用与维护保养培训讲述.ppt

高效液相色谱仪的使用与维护保养 目录 一、仪器的结构组成 二、定期维护 三、常见故障问题及排除 四、液相色谱仪的常识 五、使用注意事项 一、仪器的结构组成 1. 试剂盘 2.泵+脱气机 3.进样器 4.柱温箱 5.检测器 一、仪器的结构组成 （一）泵： 1.单元泵 2.二元泵 3.四元泵 一、仪器的结构组成 （二）进样器： 1.手动进样器 2.自动进样器 一、仪器的结构组成 （三）柱温箱： 一、仪器的结构组成 （四）检测器： 1.VWD（可变波长） 2.DAD（二极管阵列） 3.RID（示差） 4.ELSD(蒸发光散射） 5.FLD（荧光） 二、定期维护 （一）排液阀滤芯的更换 更换周期：4个月 二、定期维护 （二）活塞杆密封圈的更换 更换周期：1年 二、定期维护 （三）Seal Wash密封垫的更换 更换周期：1年 日常清洗：10%异丙醇 有seal wash组件的，无论是否使用缓冲盐，开泵之前都应该使之充满10%异丙醇 二、定期维护 （四）转子密封圈、针及针座的更换 更换周期：1年 二、定期维护 （四）转子密封圈、针及针座的更换 二、定期维护 （五）溶剂过滤器的清洗与更换 1.先用水冲洗残留之溶剂 2.将过滤器放在装有硝酸（35％）的烧杯里浸一小时以上 3.用蒸馏水冲洗过滤器干净 4.不使用超声波清洗机清洗 5.更换新的溶剂过滤器 三、常见故障问题及排除 （一）系统压力高 原因： 1 . 排液阀的虑芯脏 2 .色谱柱堵塞 3. 流动池堵塞 4. 自动进样器的转子、针及针座脏 5. 柱温箱堵塞 三、常见故障问题及排除 （一）系统压力高 解决办法 1.找到产生压力高的原因 2.更换 3.冲洗 4.打安捷伦电话求助 三、常见故障问题及排除 （二）系统压力不稳定 原因： 1 . 漏液 2 .有气泡 解决办法： 1.查找漏液点，然后紧固 2.流动相超声 3.仪器赶气泡 三、常见故障问题及排除 （三）基线不平 原因： 1.系统受污染，长菌 2.样品脏 解决办法： 1.拆除色谱柱后，（1）用80%异丙醇清洗系统 （2）先用纯净水冲洗，然后用异丙醇或甲醇清洗系统 2.使用0.22um针式滤器过滤样品 三、常见故障问题及排除 （四）样品超载 解决：减少样品浓度和进样量 四、液相色谱仪的常识 （一）色谱柱 反相：C18柱 250 mm ?4.6mm ?5μm 氨基柱150 mm ?4.6mm ?5μm 正相：SIL柱 250 mm ?4.6mm?5μm 四、液相色谱仪的常识 （一）色谱柱 柱长： 250 mm —分离度大，时间长 150 mm —分离度小，时间短 粒径：3.5 μm —分辨率高，寿命短 5 μm —分辨率低，寿命长 孔径：=200 ? —分子量小于2000~3000 =300 ? —分子量大于3000~10000 四、液相色谱仪的常识 （一）色谱柱 球形硅胶 PH范围： 2-8 四、液相色谱仪的常识 （二）试剂的极性 1.极性从大到小 水、甲醇、乙腈、异丙醇、石油醚、丙酮、正己烷、环己烷 2.相似相容原理 四、液相色谱仪的常识 （三）针式滤器(≤0.45um) 1.水 相——聚醚砜（PES），混合纤维素酯 2.有机相——聚偏氟乙烯树脂（PVDF）,尼龙（NYL）,Teflon（PTFE) 四、液相色谱仪的常识 （四）保留时间变化的原因： 1.流动相中有机溶剂比例改变。 一般有机溶剂比例变化1%,保留时间变化5~15%。 四、液相色谱仪的常识 （四）保留时间变化的原因： 2.较高温度时,保留时间短;温度较低时,保留时间长。一般温度每变化1度,保留时间会变化1～2％ 五、液相色谱仪使用注意事项 （一）日常维护 1.上机用试剂必须使用HPLC 级 2.每次使用离子对试剂等缓冲液作为流动相，管路必须用10%甲醇或乙腈清洗30 分钟 3.系统清洗：反相色谱仪器每天用纯的甲醇或乙腈清洗1～2 小时；正相色谱仪器每天用正己烷清洗0.5~1 小时 五、液相色谱仪使用注意事项 （二）色谱柱的保存 1.C18柱：保存试剂（甲醇） 2.氨基柱：保存试剂（甲醇） 3.SIL柱：保存试剂（正己烷） 长期放置注意： 1.两端使用堵头拧紧 2.室温保存