cAMP衍生物特异性激活Epac2Akt信号通路促进大-第三军医大学学报.doc

[基金项目]全军医学科学技术研究“十一五”计划课题资助项目（06MA081） [通信作者]文益民，电话：（0931）8994323，E-mail:wenyimin007@163.com cAMP衍生物特异性激活Epac2/Akt信号通路促进大鼠脊髓损伤的修复 张 涛1,文益民1* ,魏祥科2 ,李 含2 （730050兰州,兰州军区兰州总医院脊柱外科1；730000兰州，兰州大学第二临床医学院2） [摘要] 目的 研究应用cAMP衍生物特异性激活Epac2/Akt信号通路在哺乳动物脊髓损伤中的病理和生理机制。 方法 96只成年健康雌性SD大鼠，完全随机分为4组（n=24），A、B、C组均采用改良Allens重物打击法制备大鼠脊髓损伤模型。A组给予8-CPT-2′-O-Me-cAMP[0.5mg/(kg·d)]、B组给予等量10%DMSO(体积分数)、C组给予8-CPT-2′-O-Me-cAMP[0.5mg/(kg·d)]加LY294002 [0.2mg/(kg·d)] 各7天。D组为正常对照组。各组分别于1、2、3、4周采用BBB评分法评估大鼠后肢功能恢复情况，各时间点取材行HE染色、免疫荧光、实时荧光定量 PCR 检测脊髓细胞标志物（Nestin、NF200、GFAP）和通路因子(Epac2、Akt)的表达。结果 A组大鼠在术后1～4周BBB评分持续升高，均高于B、C组( P＜0.01)，低于D组( P＜0.01)。在1、2、3周，A组Epac2 mRNA表达与C组Epac2 mRNA表达差异无意义，但高于B组( P＜0.01)和D组( P＜0.01)的Epac2 mRNA。A组Akt mRNA表达高于B组( P＜0.01)、C组( P＜0.01)和D组( P＜0.01)。A组Nestin、NF200、mRNA表达在各期均高于B、C、D组( P＜0.01)。A、B、C组GFAP mRNA表达差异无意义。HE染色可见A、B、C组造模后脊髓组织结构疏松，有大量空洞形成。免疫荧光染色并进行积分光密度值分析，其结果与实时荧光定量PCR检测结果相符。结论 在哺乳动物脊髓损伤后应用cAMP衍生物能够特异性激活Epac2/Akt通路，促使神经干细胞分化和神经细胞增殖，有助于脊髓修复。 [关键词] 脊髓损伤； 环磷腺苷； Epac2； 信号通路； 大鼠 The derivative of cAMP mediated Epac2/Akt kinase signaling pathway activation promotes the repair of spinal cord injury in rats Zhang Tao1, Wen Yimin1, Wei Xiangke2, Li Han2(1 Department of spinal surgery of Lanzhou general hospital of Lanzhou military area command,2 The second clinical medical college of Lanzhou university, Lanzhou, 730005, China) [Abstract] Objective: To investigate the mechanism of cAMP derivative（8-CPT-2′-O-Me-cAMP）activated mammalian Epac2/Akt signal pathway in the physiology and pathology of spinal cord injury(SCI).Methods: Ninety-six adult healthy female Sprague-Dawley rats were randomly divided into 4 groups(n=24). The rats in groups A, B and C were made the SCI models at by using a modi?ed Allen’ s stall. The rats were subjected to the administration of 8-CPT-2′-O-Me-cAMP[0.5mg/(kg·d)] for 7 days in group A, to the administration of 10%DMSO (equal-volume) for 7 days in group B, to the administration of 8-CPT-2′-O-Me-cAMP[0.5mg/(kg·d)] and LY294002[0.2mg/(kg·d)] for 7 days