克隆动物.ppt

第十三章 克隆动物;克隆羊多利（Dolly）的诞生;克隆来源于英语“clone”或“cloning”的音译，起源于希腊文“Klone”，原意是用“插条”繁殖。曾译为无性生殖或无性繁殖. ;动物克隆;动物克隆的研究历史;1998年1月，美国威斯康星一麦迪逊大学的科学家们以牛的卵子为受体，成功克隆出猪、牛、羊、鼠和猕猴五种哺乳动物的胚胎，这一研究结果表明，某个物种的未受精卵可以同取自多种动物的成熟细胞核相结合。 1999年，美国科学家用牛卵子克隆出珍稀动物盘羊的胚胎；我国科学家也用兔卵子克隆了大熊猫的早期胚胎， 在异种克隆研究领域，目前国际上仅有印度野牛和欧洲盘羊取得成功。到目前为止应用异种核移植技术获得的活体后代都来自于亚种间核移植。 中国首例异体克隆动物———濒危动物北山羊在新疆乌鲁木齐县六十户乡降生;;;;;;获得克隆动物的方法;1.胚胎分割;;胚胎分割—— 一卵双生 ;胚胎分割—— 一卵双生 ;2.孤雌生殖;蜥蜴;蚜虫; 问 题;HANS SPEMANN ?????????????????????????????????????????????????? 1935 Nobel Laureate in Medicine for his discovery of the organizer effect in embryonic development.  1869-1941 Residence: Germany Affiliation: University of Freiburg im Breisgau ;3.细胞核移植;提供细胞核的细胞称为----核供体（donor） 接受细胞核的细胞称为----核受体（recipient）;供体细胞的细胞核移入卵母细胞后，在卵母细胞相关因子的作用下，发生了重编程回复到发育的起点状态。 核重编程的过程就是使在体细胞中被关闭,而在正常胚胎发育中表达的基因重新被激活的过程. ;重编程有三种可能的结果;细胞核移植分类;显微操作仪（micromanipulator）;胚胎细胞核移植;胚胎细胞核移植流程图;历史回顾;1981年，瑞士日内瓦大学的伊尔门泽、美国杰克逊实验室，首次对小鼠胚胎细胞进行核移植获得成功。 此后，胚胎细胞的核移植在多种动物上获得了克隆后代，如绵羊(Willadsen等,1986),牛(Prather等,1987),兔(Stice等,1988),猪(Prather等,1989),山羊(张勇等,1991)等。 直到1997年才由 Meng et al成功地克隆出两只猴,这是灵长类动物的首次被克隆。 ; 直至此时,核移植所用的供体细胞均为囊胚阶段以前的胚胎细胞。当时人们普遍认为，早期胚胎尚具有全能性，到囊胚以后则随着分化而逐渐丧失其全能性。 ;内细胞群;体细胞核移植技术; 体细胞核移植技术(somatic cell unclear transplantation)是指，将分化程度较高的体细胞移植入去核的卵母细胞中构建新合子的生物技术。;历史回顾; 1998年7月，美国夏威夷大学Wakayama等报道，由小鼠卵丘细胞克隆了27只成活小鼠，其中7只是由克隆小鼠再次克隆的后代，这是继“多莉”以后的第二批哺乳动物体细胞核移植后代。 此后，体细胞核移植技术在牛、山羊、猪等多种动物获得成功。 至1999年底，全世界已有6种类型细胞——胎儿成纤维细胞、乳腺细胞、卵丘细胞、输卵管／子宫上皮细胞、肌肉细胞和耳部皮肤细胞的体细胞克隆后代成功诞生。;多莉的诞生过程;;体细胞核移植程序;;1.核供体细胞的准备;A 组织块培养的人皮肤成纤维细胞 B 消化培养的人皮肤成纤维细胞 ;2.细胞周期的调控;;3.受体细胞准备;4.去核的方法; 盲吸去核法一般将脱去颗粒细胞的卵母细胞用含7.5ug/ml CB的培养液中清洗3-4遍后移入100ul左右的上述溶液的液滴中，同时将供体细胞加入液滴中。石蜡油覆盖后于显微操作仪上用固定针吸住卵母细胞，用去核针拨动之，使第一极体位于1点位置；去核针从3点处进针，针尖斜面部分刺入卵泡内，吸出第一极体及其下方的1/4-1/3胞质（包括细胞核）；然后从操作液中吸取形态圆，边缘略粗糙的核供体细胞，从原针吸口处注入透明带下并轻压透明带。;MII期卵母细胞;去 核 过 程;5.装核;图2 核移植的显微操作过程 A 显微注射针刺入卵母细胞前 B开始吸取第一极体 C 极体已被吸入注射针 D 去除极体后的卵母细胞 E 注射供体细胞