siRNA产品使用说明.PDF

siRNA 产品使用说明 RN: R10043.6 产品简介 锐博生物提供的 siRNA 为化学合成双链小分子 RNA，即用型。 运输保存 产品以冻干粉的形式，常温运输。收到产品后，请于-20℃~-80℃保存，冻干粉可以稳定保存一年。使用前请瞬时离心，用 RNase-free Water 配制成 20μM 储存液，分装保存于-20℃~-80℃，避免反复冻融（不超过 5 次）。 表 1 20μM 储存液的配置参考 siRNA(nmol) 0.25 0.5 1 2 5 20 溶解体积(μl) 12.5 25 50 100 250 1000 使用前须知 为避免外界因素（包括酶，极端 pH 或者温度条件等）导致产品降解，所有操作请严格遵循 RNA 操作规则。实验过程中，产品最好 于冰上放置，使用完毕后请于-20℃~-80℃小心保存。 细胞实验方法 为了降低细胞密度、试剂用量，转染效率等因素导致的孔间差异，保证实验的可靠性和可重复性，一般建议： 1）转染实验中每个转染样品至少设置3个复孔； 2）接种细胞时，每孔接种的细胞数量尽量保持一致，且细胞在各孔的表面平均分布。 1. 转染浓度： siRNA 产品最佳工作浓度因不同的细胞类型及研究目的而异。锐博生物推荐的 siRNA 初始转染浓度为 50nM，转染后检测时间为 24~72h。 最佳转染效率一般通过设置时间梯度和浓度梯度进行优化，优化的范围建议为 5~100nM。 2. 转染步骤： 以riboFECT? CP Reagent 转染 siRNA于24孔板，转染浓度为50nM为例，其他规格容器的试剂用量请参考表2。 1）接种细胞 a. 贴壁细胞：以Hela细胞为例，接种1×105~5×105个细胞至含有适量??全培养基的24孔板培养孔中，使转染时的细胞密度能够达到30~50%。 b. 悬浮细胞：以THP-1细胞为例，接种1×105~5×105个细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中。 注：①不同细胞生长速度不同，接种细胞的数量，细胞密度需要依据细胞类型，培养时间，实验目的而定；②每孔接种的细胞数量应尽量相同，使细胞均匀分布。③由于自身特 性问题，悬浮细胞相对较难转染，需要优化转染条件以便提高转染效果，如果细胞特殊，可更换为电转方式。 2）转染步骤 对于每个转染样品，请按以下步骤准备： a. 稀释 siRNA：用 30μl 1X riboFECT? CP Buffer（v2）稀释 1.25μl 20μM siRNA 储存液（v3），轻轻混匀。 b. 混合液制备：加入 3μl riboFECT? CP Reagent（v4），轻轻吹打混匀，室温孵育 0～15min，制备成转染复合物。 注：①请勿振荡，溶液可能会有浑浊，但不会影响转染；②混合液可室温放置一段时间，但不宜超过