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Click-iT EdU成像检测试剂盒 Page  PAGE \* MERGEFORMAT 6 kFluor555 Click-iT EdU 成像检测试剂盒 说明书修订日期产品编号：KGA337-100/KGA337-500/KGA337-1000 Store at -20℃, protected from light For Research Use Only 一、组份及保存温度 组份KGA337-100KGA337-500KGA337-1000保存温度稳定性组份A： EdU 0.2ml1ml2ml-20 ℃按指定稳定保存可有效放置一年组份B： kFluor555-azide 30μl5×30μl10×30μl-20 ℃，避光组份C： 10× Click-iT EdU反应缓冲液1ml5ml10ml2-8 ℃组份D： CuSO4 0.5ml2.5ml5ml2-8 ℃组份E： Click-iT EdU 缓冲液添加物30mg5×30mg10×30mg2-8 ℃组份F： Hoechst 3334225μl125μl250μl2-8 ℃ 规格:针对96孔板培养的细胞，KGA337-100可以提供至少100个孔反应的量；KGA337-500可以提供500个孔反应的量，KGA337-1000是可以提供1000个孔反应的大包装。（不同容器细胞成像的具体用量可参考附表1.EdU培养基及染色反应液的使用量参考）荧光光谱数据: kFluor555-azide: 555/565nm; Hoechst 33342: 350/461nm, bound to DNA.  其他所需试剂 10mM PBS,pH7.2-7.6 中性多聚甲醛固定液（4%多聚甲醛in PBS） 2mg/ml甘氨酸溶液（去离子水配制） 促渗试剂（0.5% Triton X-100 in PBS） 3% BSA in PBS，pH7.2-7.6 去离子水 18 × 18-mm 盖玻片 二、产品介绍 细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。最精确的检测细胞增殖方法是BrdU法。EdU法检测试剂盒是brdu方法的革命性突破。EdU（5-溴-2-脱氧尿嘧啶）试剂盒是一种嘧啶类似物，可以在DNA合成期整合入DNA双链。EdU法检测是基于“点击”反应，一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃的原子共价反应。 本试剂盒中，EdU试剂含有炔烃，而kFluor555染料试剂含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有效，易于使用。只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的EdU。标准化的戊二醛固定和去污剂促渗可以使检测试剂进入细胞，而brdu方法则需要DNA变性（如酸变性、热变性或者用Dnase消化）去暴露BrdU，从而方便BrdU抗体结合。 本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组份，可以检测细胞增殖与细胞周期分析。对于细胞周期的分析，试剂盒可以提供蓝色细胞核染料Hoechst33342。 EdU成像检测工作流程 培养细胞 可选：样本处理 EdU孵育细胞 细胞固定与促渗 检测EdU 可选：抗体孵育或其他细胞染色固定 拍照及分析 三、实验操作步骤 1、EdU标记细胞 注意： EdU的标记浓度应根据所用的细胞类型做相应的优化选择，推荐客户以10μM的EdU初始浓度进行摸索。细胞培养基、细胞生长密度及细胞类型和其他实验条件都有可能影响细胞的标记效果。预实验中，我们建议客户设置一系列的EdU浓度梯度，以确定最佳的合适您的细胞的实验浓度。您也可以参考本操作说明附表2.常见细胞系EdU孵育时间设定参考以及附表3.细胞实验EdU孵育浓度及时间参考。 1.1 以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，进行您所需要的药物处理或者其他刺激处理。 1.2 准备一份2×的EdU工作液(组份A)：以完全培养基稀释10mM的储液至合适的工作浓度。建议您以10μM的初始工作浓度开始预实验。 1.3 预热2×的EdU工作液，加入等体积的培养基，使浓度变为1×（如：需要得到10μM的终浓度，应以新鲜培养基等体积加入到20μM的EdU工作液中。） 1.4 合适时间合适条件孵育细胞，EdU孵育细胞的时间可以直接用做测定细胞DNA合成的指标，时间点选择以及孵育时间的长度取决于细胞生长速率。通过短暂的EdU孵育进行的脉冲式标记细胞可以用于研究细胞周期动力学。 2、细胞固定及促渗 注意：本参考步骤是针对以4%中性多聚甲醛固定且以0.5% Triton X-100促渗操作样本而优化的操作方法，但本参考所介绍的步骤同样可用于其他类似操作的样本，如以甲醇固定以皂苷固定的样本等