高粱中直链淀粉和支链淀粉检测方法教材.doc

检测中心文件————方法研究报告 拟稿：冯金娜 核稿：汪咏曾 高粱中直链淀粉和支链淀粉检测方法研究报告 【简述】淀粉是一种天然高分子化合物，按照结构可分为直链淀粉和支链淀粉两种。自然淀粉中支链淀粉比例较高，一般约占总淀粉的70%以上，糯高粱中支链淀粉含量尤其高，直链淀粉含量很低，且不同品种、生长时期的高粱其支链淀粉和直链淀粉含量也有差异。直链淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷键连接的多糖链，具有抗润胀性，水溶性较差，不溶于脂肪；支链淀粉又称胶淀粉,分子相对较大,难溶于水。高粱是我公司主要的酿酒原料，高粱中直链淀粉和支链淀粉的含量对白酒的出酒率和白酒品质都有重要的影响，因此建立高粱中直链淀粉和支链淀粉的检测方法，对酿酒生产与白酒品质的提升均具有重要的指导意义。 根据公司年度计划的要求，检测中心以国家标准GB 7648-87《水稻、玉米、谷子粒直链淀粉测定法》为基础建立高粱中直链淀粉和支链淀粉的检测方法。 1 实验原理 淀粉与碘形成碘-淀粉复合物，并具有特殊的颜色反应，支链淀粉与碘生成棕红色复合物，直链淀粉与碘生成深蓝色复合物。在淀粉总量不变的条件下，直链淀粉和支链淀粉的物质波峰处对应的两个波长λ1和λ2，样品在这两个波长下均有吸收。由于吸光度值具有叠加性，测定样品在某一波长下的吸光度值时其结果为直链淀粉和支链淀粉在该波长下吸光度值的总和。由直链淀粉和支链淀粉的性质可知这两种物质与碘反应时互不干扰，故可根据直链淀粉和支链淀粉显色反应后在不同波长下的吸光度值进而将样品中单一组分的吸光度值计算出来，再从建立的回归曲线方程得到相应的含量。 2 仪器与试剂： 2.1试剂 实验中所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的三级水。 2.1.1 氢氧化钠溶液：1moL/L。 2.1.2盐酸（1+1）。 2.1.3 95%乙醇（分析纯）。 2.1.4 碘贮备溶液：称取2g碘和20g碘化钾用蒸馏水溶解至100mL。 2.1.5 碘试剂：取10mL碘贮备液稀释至100mL。 2.1.6 马铃薯直链淀粉标准品：纯度为97.0%，由黑龙江省农业科学院农产品研究所提供。 2.1.7 高梁支链淀粉标准品：纯度??78.7%，由黑龙江省农业科学院农产品研究所提供。 2.1.8 马铃薯直链淀粉标准溶液：1mg/mL，称取干燥马铃薯直链淀粉标准品（2.1.6）0.1031g（相当于纯品0.1000g）于烧杯中，加入1mL95%乙醇充分湿润，再加9mL 1moL/L氢氧化钠溶液，于沸水中分散10min，冷却后转移至100mL容量瓶中并定容。 2.1.9 高梁支链淀粉标准溶液：1mg/mL，称取干燥高梁支链淀粉标准品（2.1.7）0.1271g（相当于纯品0.1000g）于烧杯中，同2.1.8的配制方法进行配制。 2.2 仪器 2.2.1 粉碎机 2.2.2 电子天平：FA2004 2.2.3 双光束紫外可见分光光度计：TU-1901 2.2.4 筛子：80目 2.2.5 索氏提取器 3 检测波长的选择 配制一系列浓度的直链淀粉和直链淀粉标准溶液，加入碘试剂反应10min，在紫外分光光度计中进行全波段扫描，其中支链淀粉最大吸收峰在532nm处，直链淀粉最大吸收峰在641nm处，因此将支链淀粉和直链淀粉的检测波长分别定为532nm和641nm。 4 空白溶液的确定和直链淀粉、支链淀粉叠加性探究 4.1 空白溶液的选择 准确吸取2.5mL高粱淀粉溶液到100mL容量瓶中，调节pH值为3.0，加入2.0mL碘试剂反应10min后进行测定。其中一组采用蒸馏水作为参比液，另外一组采用试剂空白溶液作为参比液，进行紫外全波段扫描，得到以蒸馏水为参比的扫描图谱和以试剂空白溶液的扫描图谱如图1所示。再对试剂空白溶液进行紫外全波段扫描，其扫描图谱如图2所示。从图1得知用蒸馏水作为参比液测得的紫外数据与试剂空白参比测得的数据在约550nm以上一致，但在550nm以下开始出现差异，其原因是碘开始有紫外吸收，使得水参比实验组呈现出了碘的吸收特点。为保证结果的准确性，故需采用试剂空白溶液作为参比液，来消除碘对碘-淀粉复合物的紫外干扰。 图1 同一淀粉溶液在不同参比下的紫外吸收光谱 图2 试剂空白溶液的紫外吸收光谱 4.2直链淀粉、支链淀粉叠加性实验 取3个100mL容量瓶，准确吸取0.5mL直链淀粉标准溶液（2.1.8）于第一个容量瓶中，取3.5mL支链淀粉标准溶液（2.1.9）于第二个容量瓶中，准确吸取0.5mL直链淀粉标准溶液（2.1.8）和3.5mL支链淀粉标准溶液（2.1.9）于第三个容量瓶中，加入30mL水，调节pH值为3.0，加入2mL碘试