QC7004微生物检验方法读中学验证管理规程.doc

文件内容： 1 目 的 2 2 适用范围 2 3 职责 2 4 定义 2 5 正文 2 6 相关文件 6 7 记录与附录 6 8 变更记载 6 颁发部门： 质管部 生效日期： 年 月 日 分发清单： 质管部、行政部、质管部QC、研发中心 制定/审批 制定人 审核人 审核人 审核人 批准人 部 门： 质管部QC 质管部QC 主任 质管部QA 质管部部长 质量受权人 姓 名： 刘美榛 胡敏 刘瑜瑜 魏安那 魏安那 签 名： 日 期： 目 的 建立微生物检验方法验证管理规程，规范微生物检查方法的验证。以确认加入供试品中的微生物都能生长，即该种方法用于检测时，方法适用且结果是可信的。 适用范围 本程序适用于本公司质管部的微生物检验方法的验证。 职责 质量管理部：负责本规程的起草、修订、培训、执行及监督。 相关部门负责人：负责审核本规程，验证委员会主任及副主任负责批准本规程。 验证相关部门人员应充分理解本规程，并按此执行。 定义 无 正文 5.1微生物限度检查和控制菌检查简述： 为了确保微生物检查方法的可靠性，需对微生物计数方法和控制菌检查方法进行验证。如果供试品没有抑菌作用，可采用平皿法或直接薄膜过滤法；如果供试品具有抑菌活性，可采用培养基稀释法、离心沉淀法、薄膜过滤法、中和法，或多种方法组合，以消除供试品的抑菌活性。若供试品组分或原检验条件发生改变，可能影响检验结果时，应对该供试品进行重新验证。 5.2 供试液的制备： 根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液；若需用水浴加温时，温度应不超过45℃；供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。 除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。 5.2.1 固体、半固体或黏稠性供试品： 取供试品10g，加pH7.0氯化钠- 蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1:10 的供试液；另取1:10的供试液10ml，加pH7.0氯化钠- 蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1:100的供试液。必要时可加入温度≤45℃适量的无菌吐温80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。 5.2.2 液体供试品： 取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠- 蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1:10 的供试液。油剂可加入含0.05%吐温80的pH7.0无菌氯化钠- 蛋白胨缓冲液使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混匀的供试品原液作为供试液。 5.2.3 具有抗菌活性的供试品： 当供试品具有抑菌活性时，应消除供试液的抑菌活性。可单独或联合应用以下方法： 5.2.3.1 培养基稀释法：增大稀释液或培养基的体积。例如：取一定量的供试品，至较大量的培养基或稀释液中，通过降低培养基/稀释液中单位体积内的供试品含量来消除供试品的抑菌性。测定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时，可取同稀释级的供试液1ml等量注入多个平皿中；控制菌检查时，可加大增菌培养基的用量。 5.2.3.2 离心沉淀法；取一定量的供试液，500转/分离心3 分钟，取全部上清液混合。用于细菌检查。 5.2.3.3 薄膜过滤法：使用孔径不得大于0.45um的薄膜进行过滤。取一定量的供试品加至适量的稀释液中，混匀，过滤。用pH7.0氯化钠- 蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量不大于100ml，总冲洗量应≤1000ml。 5.2.3.4 中和法：将中和剂加在所用的稀释液或培养基中。 若没有适宜的方法消除供试品中的抑菌作用，那么验证试验中微生物回收的失败可看成是因供试品的抗菌活性引起的，同时表明该供试品不能被试验菌污染。然而，供试品也可能仅对试验用菌株具有抑制作用，而对其他菌种没有抑制作用。因此，根据供试品须符合的微生物检验标准和菌数报告规则，在不影响检验结果判断的前提下，应采用能使微生物生长的更高稀释级的供试液进行方法验证试验。若验证试验符合要求，应以该稀释级供试液作为最低稀释级的供试液进行供试品检验。计数方法验证时，若采用上述计数方法总存在一种或多种试验菌的回收率达不到要求，那么选择回收率最接近要求的方法和试验条件进行供试品的检测。 5.2.4 验证试验用菌： 试验用菌应具有广泛代表性，应包括G- 菌、G+菌、酵母菌和霉菌类微生物。在控制菌检查方法验证时，采用与被检微生物相同的标准菌株作为试验菌。 5.2