DNA自身抗体的研究及其临床应用讲解.ppt

DNA自身抗体的研究进展;一、DNA抗原的分子特性; 2.DNA分子的抗原特性 １)不同构象的分子之间的抗原性差别甚 大，但又彼此交叉，还可互相转变。 ２）DNA分子具有多抗原决定簇的特点：与抗体结合时的亲和力较高。 ３）DNA抗原具有多聚阴离子特性：易产生非特异结合反应。;４) ds-DNA的抗原决定簇存在于ds-DNA分  子的构象之中。;５）DNA抗体与DNA的结合能力与DNA抗原的分子量有一定的关系，分子量越大，结合率越高。只有35bp以上的片段才能有效地与抗ds-DNA抗体结合。 ;６）DNA抗体与DNA的结合能力与DNA抗原 分子的碱基组成有关：　G+C含量高的 DNA分子更易与抗体结合。 ７）DNA分子中含有某些复杂或特殊的结构时，更易与抗体结合：如含有较多的重复序列、CpG及甲基胞密啶(mC)。; 二．Ds-DNA分子的免疫原性 １.用常规的免疫方法，ds-DNA一般不能诱导动物产生相应的抗体。 ２.来源于原核生物的ds-DNA比真核生物的 ds-DNA更容易通过免疫动物来制备抗体。 ３.在某些特定的情况下，真核细胞的ds-DNA才具有免疫原性。 ; 三．DNA的单克隆自身抗体 　　　与常规的单克隆技术相比，自身单克隆抗体的制备更为简便，不需要人工免疫动物，直接将自身免疫病的动物模型的脾细胞或病人的外周血淋巴细胞与相应的瘤细胞株融合就可建立杂交瘤，采用不同的抗原进行筛选，则可获得多种单克隆抗体。 ; 按融合细胞的来源不同，DNA抗体的杂交瘤可分为三类： 1.鼠－鼠杂交瘤：将近交的SLE小鼠模型的脾细胞与鼠的骨髓瘤细胞进行融合。 2.人－鼠杂交瘤：用SLE病人能分泌DNA抗体的B细胞与鼠的骨髓瘤细胞融合。;３.人－人杂交瘤：用SLE病人的外周血淋巴细胞或脾细胞与人的骨髓瘤细胞融合。 　　 另外将经过EB病毒转化的SLE病人的B淋巴细胞进行克隆，这种转化的B细胞亦可分泌抗ds-DNA。此法更为简便，因为细胞融合的步骤也不需要了，但这种EB病毒转化的B细胞产生抗体的量比较少。 ;　人－人DNA杂交瘤及其分泌的抗DNA抗体研究的意义： 1.通过分析单克隆抗体的特异性，可以更进一步地了解DNA在SLE中的作用。 2.作为抗原，DNA抗体又可诱导抗DNA抗体的独特型抗体。这种抗独特型??助于研究SLE产生DNA抗体的调控机制。 3.这种杂交瘤细胞本身可用于分析与自身抗体的产生有关的基因结构。 ;　DNA的单克隆抗体存在的问题 1.代表性的问题：作为一种多抗原决定簇的分子，由其引发的免疫反应包含了许许多多针对不同抗原决定簇的多克隆抗体。显然，只针对一个或少数几个决定簇的单克隆抗体，代表不了DNA引起的整个免疫反应。;2.单克隆抗体可能因静电引力与“粘性”分子呈非特异结合。 3.由于不同来源的分子之间的相似性以及某些在化学结构和性质上与DNA相似的化合物的存在，使DNA单克隆抗体的交叉反应显得尤为突出。 ; 四．DNA抗体的交叉反应 　　　 几乎所有的DNA单克隆和多克隆抗体既能与ds-DNA又可与ss－DNA反应，而且在多数情况下，DNA抗体与ss－DNA的亲和力更高。 　　　但是单纯针对ss－DNA的抗ss－DNA抗体则只能与ss－DNA结合不能与ds-DNA结合。; 　　 DNA抗体能结合的分子包括Z－DNA、某些人互合成的多核苷酸如poly(I)、poly(dT)、poly(dAdT)，POLY(dGdC)等。不少多聚阴离子化合物如心磷脂和其它磷脂、硫酸右旋糖酐、透明质酸和硫酸软骨素以及硫酸肝素等都可与ds-DNA抗体结合。; 研究和了解抗DNA的交叉反应的临床意义： 1.解释SLE病人出现梅毒试验阳性的现象。 2.利用抗ds-DNA抗体与硫酸右旋糖酐（DS）的反应，可将DS吸附在硝酸纤维素柱上，用来去除SLE病人血中的抗ds-DNA抗体。;3.对抗ds-DNA抗体和ds-DNA在SLE的发病机制中的重新评价。 　　传统的观点：免疫复合物沉积学说。 　　新的观点：DNA抗体可能通过与肾小球某些成分上的抗原的交叉反应，或者通过电荷的作用，直接结合在肾小球基底膜上，产生阻塞或导致补体介导的炎症和组织损害。 　　; 五．DS-DNA抗体的独特型 　独特型(Idiotype,Id) ：通常是指位于抗体可变区的抗原决定簇。 　私有Id(private Id)：只存在于某一种类型抗体中的Id 。 　公共Id(public Id)：几种或多种抗体共同拥有的Id。; 　 16/6公共Id：在活动性的SLE中，有　一半以上的病人血清中的DNA抗体带有的一种公共Id。 　　　16/6Id与SLE的活动性有关，病情活动时，16/6Id的滴度上升，反之则下降，SLE病人受损的组织中亦显示有16/