高效液相色谱的使用综述.ppt

HPLC色谱柱选择与维护保养;安捷伦HPLC色谱柱选择;分离模式的选择; ; 硅胶基质- pH 3~8 Al2O3 . nH2O - pH1~14 聚合物基质 - pH1~14;C-18柱---性能影响因素;硅胶纯度 ? 填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度 色谱柱尺寸 ? 填料床的长度和内径 颗粒形状 ? 球型或不规则型 粒径 ? 平均颗粒直径, 通常3-10μm 表面积 ? 颗粒外表面和内部孔表面的总和, 以m2/gram表示 孔径 ? 颗粒的孔或腔的平均尺寸, 范围80-300? ;键合类型 ? 单体键合 - 键合相分子与基体单点相连 ? 聚合体键合 - 键合相分子与基体多点相连 碳覆盖率 ? 与基体物质相连的键合相的量 封端 ? 键合步骤之后, 用短链将裸露的硅羟基键合后封闭起来;A类硅胶 Original ZORBAX SIL (1970s) 由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上金属含量高 (硅羟基的pKa低), 导致碱性化合物发生拖尾 ;ZORBAX?生产工艺 ;色谱柱尺寸 --- 对色谱分离的影响 ? 短柱 (15-100mm) - 运行时间短, 柱压低 ? 长柱 (150-250mm) - 分辨率高, 运行时间长 ? 窄径柱 (? 2.1mm) - 检测器灵敏度高 ? 宽径柱 (3-21.2mm) - 载样量高;颗粒形状 --- 对色谱分离的影响 当使用黏度较大的流动相50:50=MeOH:H2O时, 球型颗粒可以降低柱压, 延长色谱柱寿命;表面积 --- 对色谱分离的影响 高表面积对于多组份样品的分离具有较强的保留能力, 柱容量和分离度. 表面积低的填料通常能迅速达到平衡状态, 对于梯度淋洗尤为重要;大孔径填料适用于大分子分析;300? 孔径可改善蛋白质和多肽峰形;300? 孔径可改善大分子的峰形 ;键合类型 --- 对色谱分离的影响 单齿键合： 提高传质速率, 加快色谱柱平衡 双齿键合： 增加色谱柱稳定性, 增加色谱柱的载样量 ;碳覆盖率--- 对色谱分离的影响 高碳覆盖率：提高分辨率, 分析时间长 低碳覆盖率：缩短运行时间; 固定相键合 二甲基硅烷 ;;液相柱---保留值与pH的关系;1;液相柱---保留值与pH的关系;保留时间;液相柱---保留值与pH的关系;复杂组分的流动相pH选择技巧;Zorbax?色谱柱发展史;键合相-适用pH范围 ;SB-C18 80 A 300 A pH: 1~8;安捷伦HPLC色谱柱维护保养;Zorbax色谱柱=高柱效 +长寿命;色谱柱柱内体积和平衡时间;清洗液相色谱柱;0.12mm内径管线用于毛细管HPLC中2.1内径色谱柱 0.17mm内径管线用于分析型HPLC中2.1~4.6内径色谱柱 0.25mm内径管线用于半制备型HPLC中9.4内径色谱柱 0. 5mm内径管线用于制备型HPLC中21.2内径色谱柱;HPLC常用的色谱柱接头;如果伸出的管线长度过长，可能漏液 ;活塞杆与密封圈;样品: 尿嘧啶 苯酚 N, N-二甲基苯胺;检测器用灯;检测器用灯;检测器用灯;1. DAD的氘灯替代VWD的氘灯 关闭灯电源, 冷却5min以上 将lamp设定的VWD configuration的灯类型改为2140-0590 2. 灯能量测试 以水为流动相 灯预热10min以上 在化学工作站Diagnosis状态下进行波长校准, 将紫外灯的使用时间归零 ;DAD故障诊断与维护;Diagnosis界面故障原因分析 ;样品溶剂溶解强度;中性分析时为何要使用缓冲液？;0 2.5 5.0 7.5;TEA对碱性成分峰形的影响;竞争酸对酸性组分的峰形的影响;色谱柱技术 – 5988-6467EN 流动相对色谱的影响(TE40);液相分析-小诀窍;;环保;生物制药;生物制药;色谱柱技术 – 5988-6454EN 使用小体积色谱柱对于检测器响应时间的重要性 (TE32);色谱柱技术 – 5988-6428EN 不同硅胶类型比较 (TE1);???机化学– 5988-6366EN pH对苯胺取代物分析的影响 (ORCH1);;食品分析– 5988-6360EN 流动相强度对单糖和二糖分离的影响 (FD4);色谱柱技术 – 5988-6468EN 有机改性剂和pH对于选择性的影响 (TE5);色