2.4液相色谱法摘要.ppt

2.4 高效液相色谱及其在精细化学品中的应用 主要内容 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC） 高效液相色谱柱发展史 19世纪70年代中期，HPLC仪开始出现，主要填料：10 μm 的无定型硅胶颗粒。 70年代后期，发展了反相液相色谱。 80年代，HPLC 被广泛应用于化合物的分离，主要填料：粒径为5 ～ 10 μm 球形硅胶。 90年代早期，粒径为 5 μm 的高纯硅胶，即所谓的 B 型硅胶被发展，并成为这个行业填料的标准，这种 B 型硅胶含有微量的金属。 90年代后期，为了满足快速分离的需求，发展了 3 μm 或 3.5 μm 的球形硅胶，其作用和性能逐渐的获得了人们的认同和接受。 21世纪早期，为适应超快速的分离要求，粒径小于 2 μm 的填料被开发出来，发展出了整体柱、无机和有机杂化硅胶。 目前，市场上流行的分析用的 HPLC 硅胶基质填料主要为 B 型硅胶。 经典液相色谱法为基础 引入气相色谱法的理论和实验技术 高压输送流动相 高效固定相及高灵敏度检测器 现代液相色谱分析方法 2.4.1 高效液相色谱法特点-- “三高一广一快” 高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻 力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压，一般可达150～350×105Pa 。 高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。 高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng/ml，进样量在uL数量级。 “三高一广一快” 应用范围广：80%以上的有机化合物可用HPLC分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。 分析速度快、载液流速快：通常分析一个样品仅需几分钟到几十分钟的时间，一般小于1小时。 色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点 局限性： 使用多种溶剂作为流动相，成本高于气相色谱法，且易引起环境污染，梯度洗脱操作复杂； “柱外效应” ：在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低； 高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱； 不能代替中、低压柱色谱法，在200KPa至1MPa柱压下去分析受压易分解、变性的具有生物活性的生化样品。 2.4.2 HPLC与GC比较 相同：兼具分离和分析功能 均可以在线检测 不同： 1．分析对象的区别 2．流动相的区别 3．操作条件区别 2.4.2 HPLC与GC比较 1. 分析对象的区别 HPLC与GC比较 3. 操作条件的区别 HPLC与经典LC区别 1．经典LC：仅做为一种分离手段 柱内径1~3cm，固定相粒径100μm 且不均匀； 常压输送流动相； 柱效低（H↑，n↓） 分析周期长；无法在线检测 2．HPLC：分离和分析 柱内径2~6mm，固定相粒径10μm（球形，匀浆装柱） 高压输送流动相；柱效高（H↓，n↑） 分析时间大大缩短；可以在线检测 2.4.3 HPLC的分类 根据分离机制不同分为: 1、液固吸附色谱法（LSC） (liquid-solid adsorption chromatography) 2、液液分配色谱法（LLC） (liquid-liquid partition chromatography, chemical bonded phase chromatography ) 3、离子色谱法（IC） ( ion-exchange chromatography and ion pair chromatography) 4、空间排阻色谱法（SEC） ( steric exclusion chromatography )  其他色谱类型： 亲和色谱（Affinity Chromatography; AC） 手性色谱法（Chiral Chromatography；CC） 胶束色谱法（Micellar Chromatography；MC） 电色谱法（Electrochromatography；EC） 2.4.3 HPLC的类型 （1）液-固吸附色谱法（LSC） (1) 液-固吸附色谱法（LSC） 例：用LSC分离硝基苯胺 （2）液-液分配色谱法（LLC） 固定相与流