cDNA-AFLP比较当归早薹基因转录差异反应体系的建立.pdfVIP

·研究报费· 钱物教术 il粮 BI0TECHNOLOGY BULLETIN 2010 华第 9 期 cDNA幽AFLP 比较当归早薯基因转录 差异反应体系的建立 于光1 段金成I 宋秉生2 何子清2 e南京中医药大学，南京 21∞46户甘肃由民归中药材科技有限公司，兰州 73∞10) 摘 要: 建立了利用 cDNA-AFLP 技术对务归半1:相关的差异表达荔闵进行筛选的方法，优化了影响 cDNA-AFLP 试验 结泉的关键因子，包括选择性扩增模板赏、路离子浓度、dNTP 浓度。结果农明，以 1μL 稀稀 10 倍的锁扩增产物作为模板、 1. 5 mmoVLMgCl2 、 o. 6 mmoVL dNTP，进行的选择性扩增反应获得 DNA 片段分子量范阁较广，在 100 幽 1000 bp 长度范围中 均有扩增片段，是较为理想的选择性扩增的结果。聚丙烯画u要凝般也泳验证了试且告结果，在优化条件下利用部分引物组合 可以较好地，比较早1:当归在-阂转录水平发生的差异。 关键词: 务归平1: cDNA-AFLP 反应体系 农达差异 Optimization of cDNA-AFLP Reaction System for Early Bolting Angelica sinensis (Oliv. ) Diels YU Guang l Duan Jin-ao l Song Bingsheng Z He Ziqing Z ( I 胁njing Univmíly 01 Chinese Medic阳 ， Nanjing 210046; % Garuu M，切gui Chi1ll!e Medicinal Mαterials Technology Co. , Lt矶 ，Lanzhou 73ω10) Abstract: In this study ,the reaction system of cDNA-AFLP for Angelica si，旧时isw创倒tahlished , template ， dN霄， Mg2 + of selective amplification w幽 optimized. The stable reaction system wss established:2O μL selectíve amplificatíon reaction system containing 1 j!.L di- luted pre amplification products , 1. 5 mmoVL MgCl z ,0. 6 mmoνL dNTP. In thís reaction system , amplification products in the length range ahout 1∞叶创lO bp. cDNA-AFLP products were resolved in a 6% denaturing polyacrylamide 盹quencing gel run with 1 x TBE electro- phores皿 buffer. Key words: Angelica sinelL!is (Oliv. ) Diels Early bolting cDNA-AFLP Reaction System Gene expre幽ion differences 当归为伞形科( U mbelìferae )当归属 (Angelica) 植物 Angelica sinens必( Oliv. ) Diels 的干燥棍，为大宗 中药材品种。始载于东议《神农本草经) ，列为中 品，具有补血洒刷、调经止痛、润燥滑肠之功效，为临 床妇科最常用中药之一，自古就有十方九归之 臂，又回药食两用阔内外需求最院大。然而，当归在 主产地甘肃眠县等地种植过程中提前抽鉴(早蔓) 率高达 20% -60% ，严重影响着当归的产景和品 质，制的着当归产业的健康发腿。主产地甘肃省农 业相关部门对眠归早墓的成因，多从生态因子及营 收稿日朔 :2010-06喃13 养状况进行了一些相关研究[14] ，但未有深入和突 破，尚未取得有效防治措施。随着~归需求嚣的日 增，解决当归早薯问题对当归的产业化发展显得尤 为迫切。 从拟南芥、水稻等模式植物的研究进展发现，高 等植物的开花诱导过程受自身遗传因子和外界环境 因素两方由决定，是开花基因在时间和空间上顺序 表达的结果[4-7J 0 cDNA-AFLP 是从 AFLP( amplified fragment length polymorphísm)衍生而来的 RNA 指纹 识别技术，现已发展成为较为成熟的转录组研究技 基金项目: ~国家十一五科技支撑计划资助项目 (2∞6BAI09B05