DPSCs））试剂和材料.PDFVIP

PriCells: DPSCs/SHED 的原代培养 Stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) 试剂和材料： 1. 无镁和钙的 PBS 平衡盐溶液（PBSA）； 2. MSC 培养基：含 2mmol/L 谷氨酰胺的 α-MEM，添加 15%胎牛血清， 0.1mmol/L 左旋抗坏血酸磷酸盐，100U/ml 青霉素和 100μg/ml 链霉素； 3. Ⅰ型胶原酶； 4. 中性蛋白酶； 5. 免疫磁珠分选时所需试剂； （1） 含 1%BSA 的 PBSA （2） 与 DPSC 反应的一抗，用 STRO-1（小鼠抗人 MSC；IgM），CC9（小 鼠抗人 CD146/MUC-18；IgG2a），或 3G5（小鼠抗人外膜细胞；IgM） （3） 羊抗小鼠 IgG-结合或大鼠抗小鼠 IgM-结合磁珠 6. 培养瓶或培养皿； 7. 手术刀片和刀柄； 8. 70μm 细胞滤网； 9. 回转式混合仪； 10. Dynal MPCR-1 磁分离器 实验方法： 1. 用手术刀片将牙髓组织切成小碎片； 2. 将剪碎的组织放入胶原酶/中性蛋白酶混合溶液中（1：1）； 3. 37℃孵育 30—60min，间歇地摇匀组织/消化酶混合物； 4. 消化后，加入足够的 MSC 培养基，终止酶的活性； 5. 将悬液经 70μm 细胞滤膜过滤，去除细胞碎片，得到单细胞悬液； 6. 500g 离心 6min； 7. 倒掉上清液，用 MSC 培养基重悬细胞。然后进行免疫磁珠分选； （1） 和能与 DPSC 细胞反应的一抗孵育，包括 STRO-1（小鼠抗人 MSC； IgM），CC9（小鼠抗人 CD146/MUC-18；IgG2a），或 3G5（小鼠抗 人外膜细胞；IgM），20μg/ml，冰上孵育 1h； （2） 用含 1%BSA 的 PBSA 洗两遍，600g 离心 6min； （3） 羊抗小鼠 IgG-结合或大鼠抗小鼠 IgM-结合磁珠的任意一个二抗孵 育，4℃回转式混合仪 40min； （4） 根据产品说明书推荐的方案，通过 Dynal MPCR-1 磁分离器分离结合 磁珠的细胞； 8. 细胞计数，按（1×10）×103 个细胞/cm2 密度接种到培养瓶或皿上； 9. 在 MSC 培养基、37℃和 5%CO2 的培养箱中培养； 10. 细胞分离后 7 天，用 PBSA 洗培养瓶，更换培养基。之后可以一周两次更 换培养基，直至细胞达到汇合； PriCells 提供： 1. 各种原代细胞特制基础培养基； 2. 各种原代细胞培养特制添加剂； 3. 原代细胞分离试剂盒； 4. 原代细胞鉴定试剂盒； 5. 原代细胞转染试剂盒； 6. 原代细胞总蛋白质抽提物； 7. 原代细胞总 RNA； 8. 原代细胞总 DNA；