pBM21快速克隆试剂盒.PDFVIP

地 址：北京市石景山区景山财富中心 329 电 话：01052609503 网 址： pBM21 快速克隆试剂盒 销售部：biomed2005@163.com 技术部：biomedsupport@126.com 测序部：biomed2005@ 合成部：oligo@ （pBM21 quick cloning kit） 使 用 说 明 书 试剂盒组成 组成 CL114-01 (20次) CL114-02 (20次×3) pBM21 Vector (40ng/?l ) 20?l 20?l×3 2×T4 DNA ligase master 100?l 100?l×3 Blunting Enzyme 20?l 20?l×3 Control Insert 5?l 5?l PBM21F 0.1OD 0.1OD ×3 PBM21R 0.1OD 0.1OD ×3 保存条件：-20 ℃ 保存一年 产品介绍 pBM21快速克隆试剂盒为一种阳性选择克隆系统，克隆区域位于pBM21质粒的自杀基因（lethal gene）内部。当连接 产物转化大肠杆菌后，有外源片段的插入的重组质粒导致载体上的自杀基因功能丧失，细菌存活，无片段连接（载体自连） 时，自杀基因表达的毒蛋白使细菌不能存活。该试剂盒利用T4 DNA 连接酶（T4 DNA ligase）的连接活性将平末端DNA片 段克隆到具有磷酸化末端的线性化载体pBM21中。适用于克隆由Pfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶扩 增的平末端PCR产物或各种方法产生的平末端双链DNA片段。由Taq、Tth和klenTaq等DNA聚合酶扩增的非平末端PCR产 物，可通过平末端化酶（Blunting Enzyme）处理成为平末端DNA用于连接。阳性克隆可以用试剂盒提供的引物PBM21F和 PBM21R进行菌落PCR或测序鉴定。 产品特点 ⑴连接反应仅需5-30分钟。 ⑵适用于平末端PCR产物和平末端双链DNA片段 ⑶适用???磷酸化或非磷酸化的DNA片段 ⑷pBM21为氨苄抗性，具高拷贝复制起始子 操作步骤 1.片段的准备 ⑴平末端PCR产物或者平末端酶切产物。 ⑵非平末端PCR产物和粘性末端酶切产物的平末端化处理。 PCR扩增结束后，往反应管中加入1?l的Blunting Enzyme，72℃继续保温15-30分钟；酶切完成后，往反应管中加入终 浓度为0.2?M的dNTPs以及1?l的Blunting Enzyme，72℃保温30分钟； ⑶1%的琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段，切胶回收目的片段。 2.连接反应 按照左表所列，在一个0.2ml PCR管中