IAA的生物鑒定小麦胚芽鞘法.pptVIP

IAA的生物鉴定-小麦胚芽鞘法 实验目的 ?生长素（IAA）是公认的五大类植物激素之一，对植物具有独特的生理效应。在植物激素的早期研究中，多以其生物效应作为定量测定及鉴定的方法。本实验旨在学习IAA的生物鉴定方法。 实验原理 本实验采用小麦胚芽鞘切断伸长法，其原理是：IAA有促进胚芽鞘和茎内细胞伸长的作用，在切去小麦胚芽鞘的顶端后，将断绝IAA来源的胚芽鞘伸长部分切成一定的鞘段，放在含有不同浓度的IAA溶液中，根据其伸长度与IAA浓度（0.001-1 mg/L范围内）的对数呈线性关系，因而可绘制出一条标准曲线，根据在被测样品提取液中培养的芽鞘切段伸长长度，即可在标准曲线上查出提取液中IAA的含量。 材料、仪器与试剂 : 植物材料：小麦种子（用于绘曲线）、其它植物的IAA提取纯化液； 仪器：恒温箱、具盖搪瓷盘、镊子、移液管、培养皿、载玻片、圆形滤纸、刀片、坐标纸； 试剂：IAA母液（精确称取IAA 17.5 mg装于烧杯中，先用少量无水乙醇溶解后，再用蒸馏水定容至100 ml，其浓度为10-3 mol/L作为母液，冰箱保存1个月左右、 缓冲液（pH 5.0）[称取KH2PO4 1.79 g，柠檬酸（C6H8O7 · H2O）1.019 g，蔗糖20 g，溶于重蒸水中并定容至1000 ml、种子消毒液（饱和漂白粉溶液或0.1%升汞溶液） 5. 标准曲线绘制：在半对数坐标纸上，芽鞘切段增长（%）为纵坐标，以IAA浓度的对数（-lgC）为横坐标，绘一条标准曲线。其中， 增长（%）=（处理总长-对照总长）/原来总长×100 6.结果计算： 按照公式：C=（A×B）/W×（V1/V2）计算未知样品IAA的含量， C—样品中IAA含量（μg/g） B—1 mol IAA为0.17519 μg；A—标准曲线查得IAA浓度（mol/L）；W—样品重量（g）；V1—样品提取液（ml）； V2—样品测定液（ml）。 * 实验步骤:? 1.???? 材料准备：挑选品种纯、大小均一的饱满小麦种子消毒后，用自来水冲洗干净，将种子播入内垫湿润滤纸的具盖搪瓷盘中，腹沟朝下，种胚均朝一个方向，加盖，置于25℃暗室或恒温箱中催芽生长，相对湿度85%。  ? 2.????鞘段切割：小麦出芽后3 d的胚芽鞘长度达25~35 mm，精选长度一致（28~30 mm）的幼苗60株作为测定材料（其芽鞘对IAA最敏感）。用刀片切取芽鞘尖端0~3 mm一段（丢掉），接着切取5 mm（3-8 mm一段）工作实验（此段对IAA最为敏感），立即浸入大量蒸馏水。以除去切段中的内源IAA。 ? 3.?鞘段培养：首先配制0（空白，水）、10-4 mol/L、10-5 mol/L、10-6 mol/L、10-7 mol/L的IAA系列标准溶液，其方法是，取干洁培养皿6套（0-5号），分别加入缓冲液（pH 5.0）9 ml，0号加蒸馏水1 ml，向1号加10-3mol/L母液1ml，混匀即成10-4 mol/L IAA溶液；从中吸取1 mol加到2号，则成10-5 mol/L IAA溶液；再从2号吸取1 ml加入3号，从3号吸取1 ml加到4号，这样3号与4号的浓度分别为10-6 mol/L和10-7 mol/L；向5号加入被测的未知浓度样品提取液1 ml，然后将用水浸泡过的鞘段用滤纸吸干其外附水分，将鞘段放入培养皿中，每个培养皿放10段，用黑纸将培养皿包住置于25℃的温箱或暗室中培养24h。 ?4.?鞘段测量：?　　用尺子测量鞘段长度，精确到0.1 mm，并求出每段处理平均长度。 *