20141普通生物学实验教案.doc

实验一：线粒体和液泡系的超活染色与观察 【课前预习】 1．什么是液泡系？ 2．为什么不能用一种活体染料同时观察多种细胞器？ 【目的要求】 1. 观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、发育和分布 2. 了解细胞和细胞器的超活染色技术 【基本原理】 线粒体是细胞内一种重要细胞器，细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B（Janus green B）是线粒体的专一性活细胞染色剂，毒性很小，属于碱性染料，解离后带正电，由电性吸引堆积在线粒体膜上。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，从而使线粒体显色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。 中性红对液泡系的染色具有专一性，将活细胞中的液泡系染成红色。 【实验用品】 1. 器材：显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸 2. 试剂：Ringer 液、1/5000 詹纳斯绿B、1/3000 中性红 3. 材料：人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦（或绿豆）幼根根尖 【方法步骤】 1．线粒体的超活染色与观察 1）口腔上皮细胞线粒体的超活染色：1/5000 詹纳斯绿B1-2 滴，口腔上皮细胞（牙签刮取），载玻片于37℃恒温染色10-15min，显微镜下观察。 2）洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察：1/5000 詹纳斯绿B 溶液1-2 滴，洋葱鳞茎内表皮，载玻片于37℃恒温水浴染色10-15min，显微镜下观察。 2．小麦（或绿豆）幼根根尖液泡系的中性红染色观察 小麦（或绿豆）幼苗根尖（1-2cm）纵切面切片，1/3000 中性红溶液1 滴染色5-10min，载玻片于37℃恒温水浴，盖上盖玻片压扁根尖，显微镜下观察。 【实验结果】 口腔上皮细胞的线粒体分布 洋葱内表皮细胞线粒体分布 植物根尖液泡的中性红染色 【实验报告】 1．绘出人口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布并简要分析。 2．绘出绿豆幼根根尖组织液泡系的形态与分布并简要分析 。 实验二 人类巴氏小体的观察巴氏小体1．了解X染色体失活假设及剂量补偿效应的机制；2．学习人类性染色质的检查方法。 【基本原理】 巴氏小体又称X小体：巴氏小体该失活的染色体在形态学上呈异染色体即螺旋压的很紧，染色深而致密呈现三角或椭圆形小体紧贴核膜内缘，大小约1～1.5 μm，数量为x染色体数减一）X染色体所具有的一份基因的遗传效应基本相当，达到一种剂量补偿口腔粘膜细胞固定液（甲醇:冰醋酸＝3:1）苯酚品红染液取材腔粘膜细胞：受检者清水漱口数次，用洁净牙签从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮2～3次，第一次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片上。固定置新配置的甲醇:冰醋酸固定液（3:1）0min；往载玻片 min；滴加5mol/l盐酸水解约5s；蒸馏水（缓水流）3.染色、制片染色～min（勿干），细水洗去染液，晾干。镜检油镜观察 （2）计数：选择核较大，核质颗粒少，染色均匀清晰、核膜完整的细胞核进行计数，每份标本至少计数50个细胞中X染色质出现得概率。 临床指标：正常值男性为0～3%，女性为20%以上。 【实验结果】 【注意事项】 漱口要干净，在镜检镜1．绘制巴氏小体巴氏小体雌配子和雄配子卵细胞和精子I：同源染色体分离 前期I: 持续时间较长 细线期: 染色体呈细的染色线,其上分布很多染色粒,形似念珠; 偶线期: 同源染色体开始配对, 不易与细线期绝对分开 粗线期: 同源染色体完成配对,染色体明显缩短变粗, 双线期: 配对的同源染色体开始分离,染色体图像呈现纽花状 终变期: 染色体缩的更短,呈V, O, 8和X形状，均匀分散，利于计数 中期I 各个二阶体（四分体）排列在赤道面上 后期I 同源染色体分开，移向两极 末期I 移动到两极的染色体解旋恢复到染色质状态 减数分裂II：姐妹染色体分离 (同有丝分裂) 中间期： 时间短，因物种而异 前期II：时间短，同末期I 中期II：染色体排列在赤道面上 后期II：姐妹染色体分离并移向两极 末期II：移动到两极的染色体解旋恢复到染色质状态 （四）植物花粉减数分裂 植物花粉形成过程中，花药中某些细胞分化成小孢子母细胞(2n)，每个小孢子母细胞(2n)减数分裂后，产生4个小孢子（单核花粉，n，单倍体） 【实验用品】 1．材料：蚕豆 3．试剂：甲醇、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醇、树胶、改良苯酚品红染色液。 【方法步骤】 （一）取材固定 取材的时间及材料大小必须十分恰当，才能获得