放射性自显影技术探析.ppt

第四章 放射性自显影技术;第一节 原理和一般制作程序; 放射性自显影的特点 （1）准确定位； （2）灵敏度高； （3）能保持机体的完整结构； （4）可以长期保存； （5）操作简便，不需要复杂的仪器和设备。 局限性： 定量误差大，只作相对定量；测定的速度较慢。;（一）自显影标本的制备 （二）曝光 （三）显影 （四）定影 （五）水洗及干燥;1. 洗净； 2. 吸水纸吸干； 3. 平铺于标本夹； 4. 干燥。; 曝光 : 把照相乳胶曝露于射线而产生潜影。 1.感光材料的选择: 由溴化银和明胶组成。 明胶是溴化银的支持剂，又是溴原子的吸收剂；它决定着乳胶的通透性、吸水膨胀、浓度稀释和坚膜作用等特性。 而乳胶的敏感度决定于溴化银的浓度、颗粒大小及其配制方法。; ; （1）在有效期内使用。 （2）周围不能有放射性物质。 （3）X射线乳胶片和幻灯片应注意避光、防潮、防热，最好在恒温恒湿房间（15~20oC）保存； （4）液体核乳胶应置于棕色玻璃瓶中，外用黑纸包好，再用塑料袋包好，保存于4oC冰箱内。; 2. 曝光 （1）潜影的形成 将溴化银的晶体点陈制作成有缺陷的，这些缺陷构成潜影过程中的敏化中心。 当核射线、光线、热、压力等作用于溴化银时，溴化银中的电子便向敏化中心移动，形成带负电荷的静电层，然后正电荷的银离子便向静电层聚集而变成银原子，形成潜影。;; （2） 曝光时间 a) 以公式计算曝光时间： 设L为单位面积上衰变了的放射性活度； A0为单位面积上开始时的放射性活度； At为单位面积上曝光结束时的放射性活度。 由 L = A0 – At； At= A0 e-λt 得： t = Ln; b）经验估计 要使X乳胶产生适宜的黑度，大约需要500～1000万β粒子或100～200万α粒子/cm2。 对于β粒子来说： N/A t c）实验曝光法; 显影 指感光后形成潜影的乳胶，在显影剂的作用下，使潜影转化为金属银的过程。 （1）显影液的组成： 显影剂：常用米吐尔，主要起还原作用。 促进剂：常用碳酸钠，维持碱性条件。 保护剂：常用亚硫酸钠，中和氧化产??。 抑制剂：常用溴化钾，抑制未感光的银盐。 ;（2）显影条件 配制好的显影液应盛于带盖的深色玻璃瓶中，置于阴凉处或冰箱中。 在温度为18～20oC 的条件下，显影时间约为5 ～ 6 分钟。; 定影 定影剂硫代硫酸钠和溴化银作用，将溴化银溶解，从而使未感光的银盐从乳胶中溶去而成为透明膜。 其反应式如下： AgBr + Na2S2O3 ? NaAgS2O3 + NaBr NaAgS2O3 ? Na+ + [AgS2O3]- NaAgS2O3 + Na2S2O3 ? Na3Ag(S2O3)2 ; （1）定影剂：硫代硫酸钠，遇酸易分解。 （2）保护剂：常用亚硫酸钠，抑制定影剂的遇酸分解。 （3）停显剂：常用醋酸、硼酸，中止显影。 （4）坚膜剂：常用明钒、铬钒。; 3. 定影条件 温度以19~20 oC为宜，定影时间约为10 ~ 15分钟。 （五）水洗及干燥 定影后要经充分水洗，以清除残余的定影剂和未被显影的银盐。 一般要求在流水中冲洗20~30分钟，然后在空气中晾干。;第二节 放射性自显影的制作方法; 二、光学显微自显影 (一)方法 1. 接触法 将试验样品制成石蜡切片，用蛋白甘油将石蜡切片贴在载片上，可先染或曝光后染色，干燥后在暗室中将乳胶面对切片，紧密接触，进行曝光。;; 2 . 液体乳胶法 在暗室安全灯下，将所需的乳胶称出，使其装入烧杯中，置于40oC水浴溶解。然后采用滴涂或浸蘸法将乳胶直接加在载玻片上，并使均匀地铺开。凉干后连同标本一起进行曝光。 具体又可分为：涂布法和浸蘸法。;涂布法和浸蘸法示意图; （二）染色 1. 前染 是指涂核乳胶前对切片进行染色。 　　优点：乳胶层不被染色，与后染相比颜色清晰鲜明。缺点：染色处理可能引起标本中放射性的损失；对易溶性放射性化合物不宜采用前染。; 2. 后染 是指在切片涂布核乳胶、曝光、显影、定影后进行的染色。 优点：没有前染的放射性损失问题；