农残分析10-液1资料.ppt

第五章 高效液相色谱法;目录;基本要求:;一、概 述; 20世纪40年代出现了薄层色谱法，操作方便，分析速度加快，但重复性差，难以定量。 60年代初吉丁斯(J.C.Giddings)将气相色谱理论修正后用于液相色谱，为其现代化奠定了理论基础。以后在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化；这种色谱技术称为高效液相色谱法。;1.1 HPLC与经典柱色谱法相比，具有以下特点： 1．高压 为了使流动相能迅速地通过色谱柱，必须施加高压 2．高速 使用无脉动的高压泵、流动相的流速一船为1—10 ml／min 3．高效 使用颗粒均匀的新型细粒固定相，提高了分离效率，有时一根柱子可同时分离100种以上的组分。 4．高灵敏度 应用各种高灵敏度的检测器，可测定微量组分。使用紫外检测器，最小检测量可达1×10—9g。 5．高度自???化 利用微处理机控制色谱操作条件和处理色谱数据，实现了高度自动化。 6．流出组分容易收集 ; 1.2 HPLC 与GC的差别 (1) 应用领域不同：在已知的化合物中，只有20％可用GC测定，而HPLC可检测的对象占有机物总数的80％一85％； GC局限于易挥发和热稳定农药的分离和分析；HPLC可分离和分折不挥发的、热稳定性差的以及离子型的农药。 (2) GC的分离是基于混合组分在固定液中的溶解度不同，使用的流动相通常是惰性气体。 GC主要是通过改变固定相和改变柱温来改善分离效果。 HPLC的流动相为液体，它对样本具有一定溶解性能，除了运载样本组分通过色谱住和进入检测器外，还参与色谱分离过程；在液相色谱中除通过改变固定相改善分离效果外，通常用改变流动相组成来改善分离; (3) HPLC的柱温受流动相沸点的限制，通常在室温或略高于室温的条件下测定，分离时温度较低是它的优点，能保留农药的原来分子，可制备农药标准品。 (4) 农药分子在液体中的扩散系数比在气体中小4—5个数量级，所以在HPLC中必须特别注意柱外效应对分离的不良影响。 (5) 液体的粘度比气体的粘度大2—3个数量级，所以HPLC的柱长通常不超过30cm，而GC可采用长柱 (6) 液体是不可压缩的，而气体可被压缩，因此在GC中与载气体积有关的参数都必须进行校正。 ;二、基本原理; V—— 保留体积； t —— 保留时间； W ——为峰宽； H ——为峰高; 根据图5－1的两个峰，选择性可用下式表示： （5－1） t0为溶剂保留时间，t1和t2为峰1和峰2的保留时间，式中k1和k2是农药1和2的分配系数。 （5－2） ;2.1.2 容量因子 某一特定化合物在色谱柱上的容量因子是衡量该柱对此化合物的保留特性，化合物的净保留时间与非滞留时间之比，根据图5—1，峰1的容量因子为： （5－3）; 2.1.3 柱 效 柱效是衡量某一特定色谱柱对化合物的谱带展宽度和改