Hi-Q试剂盒上机测序标准操作规程选编.docx

上机测序（Hi试剂盒）标准操作规程 1.目的 明确上机工作职责，规范乳液PCR和模板富集的操作规程。 2.应用范围 DA8600上机测序。 3.职责 上机人员对执行本规程负责，主管监督检查， 质量部人员抽查执行情况。 4. 试剂、耗材和仪器 4.1 试剂和耗材 试剂名称货号厂家Ion PI? Hi-Q? Sequencing 200 KitA26772LifeION pi chip kit v3 8 packA26771LifeIon?Proton??W-2?Wash?BottleA24893Life2N NaOH液体71474sigma10ul带滤芯低吸附盒装枪头TF-10-L-R-SAxyGen100ul带滤芯低吸附盒装枪头TF-100-L-R-SAxyGen200ul带滤芯低吸附盒装枪头TF-200-L-R-SAxyGen1000ul带滤芯低吸附盒装枪头TF-1000-L-R-SAxyGen低吸附1.5 ml离心管MCT-150-L-CAxyGen0.2ml PCR管PCR-02-CAxyGen4.2 仪器 设备型号厂家Ion ProtonDA8600Life Technologies单道移液器0.1-2.5μL;Eppendorf单道移液器0.5-10μL;Eppendorf单道移液器10-100μL;Eppendorf单道移液器100-1000μL;Eppendorf单道移液器20-200μL;Eppendorf 5.操作流程： 6. 上机操作:： 6.1 创建一个Plan Runs 6.1.1 浏览器输入测序仪IP，进入Torrent Server界面，输入账号密码，登陆主界面； 6.1.2 选取Plan标签中的Sample，进入Sample Sets，点击右边Import Samples from file，进入Import Samples界面，如下所示： 点击Sample file Format ，下载模板，模板里表头不变，需要填写Sample Name (required)、Barcodekit、Barcode、sampletype（或者nucleic_acid_type，不同测序仪可能不一样）四列，Sample Name (required)填写文库名称；Barcodekit填写IonXpress（大小写不要错）;Barcode填写IonXpress_0**（大小写不要错）例如IonXpress_001；sampletype（nucleic_acid_type）填写DNA或者RNA。填写完毕保存。回到刚才的浏览器界面，点击Select file选择刚才修改后的模板，然后点击Add Sample Set，填写Sample Set Name， Group Type选择Other，点击 Save Finish，进入Sample Sets界面，刚刚设置的plan位于第一行（如下图所示）；Status显示状态为 created，点击右侧设置按钮， 进入如下界面： 选择 show all Templates，下拉菜单选择对应的panel信息，点击Plan Run。 6.1.3 设置Save Finish项，Plan name不做修改，点击Save and Finish； 6.1.4 完成配置，在Planned Runs中能够看到已设置完成的样本，在右侧设置中Review选项再次确认具体参数配置。 6.1.5 记录Run code，用于上机时选择程序以及下机信息录入。 6.2 清洗并初始化Proton测序仪 Proton测序仪试剂位置： 开始之前需要新鲜准备1M NaOH溶液，使用18 MΩ的水稀释10M NaOH配制。 关键点：操作严格控制污染，Tube标明用途，不能交叉使用，不能重复使用，更换新sipper时sipper不能接触到任何别的东西或者手指，水洗的sipper及Tube在Run前后可重复用一次，氯洗的sipper及Tube均不能用于水洗。 检查氮气罐（高纯氮）压力在500psi以上，输出压力20-30psi之间。打开氮气罐阀门及减压阀阀门。 准备清洗： 1）18 MΩ的水。 2) 两个140 ml的Reagent Tubes。（kit自带；使用前标记好C1和C2） 3) Collection Tray。 4) 清洗芯片（清洗过程中芯片始终放置在机器中）。 注：清洗芯片是用旧的芯片用来做清洗。这张清洗芯片可以用一周。 5) 用过的sippers（之前一轮run剩下的或者机器自带的）。 6) 只用于氯洗： Ion Cle