《食品微生物学》实验指书《食品微生物学》实验指导书.doc

PAGE  《 食品微生物学 》课程 课程编号：419005 实 验 指 导 书 主撰人 曾 智 审核人 陈跃进 单位：生命科学系 二O一二 年 六 月 目 录 前言1实验一、显微镜油浸系物镜的使用与微生物形态观察3实验二、细菌的革兰氏染色6实验三、微生物细胞大小测定和浓度测定8实验四、培养基的制备与灭菌12实验五、环境中微生物的检测17实验六、水中细菌总数检测20 PAGE 22 前 言 实验总体目标 微生物学实验课是一门操作技能较强的课程。通过本课程的学习，要求学生牢固地建立无菌概念，掌握微生物实验的一套基本操作技术；树立严谨、求实的科学态度，提高观察、分析问题和解决问题的能力；树立勤俭节约、爱护公物、相互协作的优良作风。 ⒉ 适用专业年级 生物技术专业二年级第一学期 ⒊ 实验课时分配 24 实验项目实验要求实验类型每组人数实验 学时实验一 显微镜油浸系物镜的使用与微生 物形态观察必验证24实验二 细菌的革兰氏染色必验证24实验三 微生物细胞大小测定和浓度测定必综合24实验四 培养基的制备与灭菌必综合24实验五 环境中微生物的检测必验证24实验六 水中细菌总数检测必综合24 实验环境 在微生物学及发酵工程分室中进行，要求至少提供8套可用的仪器设备，分析天平1台，离心机1台，分光光度计1台，恒温水浴3台，高压蒸汽灭菌锅2台，超净工作台3台，恒温摇床2台，恒温培养箱2台，干燥箱1台，冰箱1台。实验室面积60 M2以上，通风、照明设施良好，消防设备齐全，疏散通道正常。 实验总体要求 通过本实验课程的教学，学生能基本上达到独立完成实验内容，通过老师的指导可完成研究性实验内容，能将微生物菌种分离与鉴定、无菌操作等相关知识应用到课程设计、创新性研究、毕业论文等实践性环节中。 本课程的重点、难点及教学方法建议 （1）重点：无菌操作、微生物分离与鉴定等。 （2）难点：严格按照微生物实验操作要求进行各项实验，并理解各注意事项的原因。 （3）教学方法建议：注意理论与实际相结合，重视动手能力的培养和锻炼，对实验结果的可靠性进行对照分析和检测分析。对理论性较强、较为抽象的问题、原理着重讲解，如革兰氏染色法的原理和应用。 实验一 显微镜油浸系物镜的使用与微生物形态观察 实验目的 掌握显微镜低倍镜和高倍镜的使用方法，了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法。 实验主要设备及材料 微生物标本装片，香柏油，二甲苯，光学显微镜，擦镜纸。 实验原理、方法和手段 油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。当镜与装片之间的介质为空气时，由于空气（n= 1.52）的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。当以香柏油（n=1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不仅增加了视野的照明度，更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。可见光的波长平均为0.55μm。当使用数值孔径为0.65的高倍镜时，它能辨别两点之间的距离为0.42μm；而使用数值孔径为1.25的油镜时，能辨别两点之间的距离则为0.22μm。 ?? ? ? ? ? ? ? 光学显微镜的成像原理（倒立的虚像） 介质为空气与介质为香柏油时光线通过的比较 实验内容与步骤 （一）观察前的准备 1、将显微镜置于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约4cm。坐正后用左眼观察。 2、调节光源：将低倍物镜转到工作位置，把光圈完全打开，聚光器升至与载物台相距约1mm左右。转动反光镜采集光源，光线较强的天然光源宜用平面镜，光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜，对光至视野内均匀明亮为止。观察染色装片时，光线宜强；观察末染色装片时，光线不宜太强。 （二）低倍镜观察染色装片 首先上升镜简，将枯草芽孢杆菌染色装片置于载物台上，用标本夹夹住，将观察位置移至物镜正下方，物镜降至距装片0.5cm处，适当缩小光圈然后两眼从目镜观察，转动粗调节器使物镜逐渐上升(或使镜台下降)至发现物像时，改用细调节器调节到物像清楚为止。移动装片，把合适的观察