第四节 微生物的培养与应用.doc

　　 微生物的培养与应用主讲：黄冈中学优秀生物教师　王小敏 课题背景： 　　19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。经过一番研究，法国科学家巴斯德发现，导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。由此人们认识到保持培养物纯净的重要性。 　　防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。在实验室培养微生物，一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面需要确保无处不在的其他微生物无法混入。在课题1中，我们将通过培养大肠杆菌（Excherichia coli）的实验，学习微生物培养的基本技术。 学习目标： 1、了解有关培养基的基础知识； 2、进行无菌技术的操作（重难点）； 3、进行微生物的培养。 一、基础知识 （一）培养基 　　培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 1、培养基的类型和用途 　　（1）按物理状态来分： 类型配制特点主要应用固体培养基加入琼脂较多菌种分离，鉴定，计数半固体培养基加入琼脂较少观察运动、鉴定、菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养　　　 　　液体培养基： ? 　　（2）按功能来分： 培养基类型配制特点主要应用鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离　　例如： 　　鉴别培养基：用含有伊红—美蓝的培养基鉴别是否存在大肠杆菌等细菌：如果有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。 　　选择培养基：用含有青霉素的培养基可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离到真菌（酵母菌和霉菌）。 　　（3）按成分来分 培养基类型配制特点主要应用合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不??确工业生产2、培养基的营养成分 　　不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质。另外还需要满足微生物生长的pH、特殊营养物质，例如：生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物，如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 碳源、氮源、生长因子的比较 ?来源常用原料功能碳源CO2、NaHCO3、糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等糖类构成细胞物质和一些代谢产物，有些还是异养型生物的主要能源物质氮源N2、NH3、铵盐、硝酸盐、尿素、牛肉膏和蛋白胨等铵盐、硝酸盐等合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物生长因子维生素、氨基酸、碱基?酶、核酸等的组成成分1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 培养基组分提供的主要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素蛋白胨10g氮源和维生素NaCl 5g无机盐H2O定容在1000mL氢元素、氧元素3、培养基配制原则： 　　（1）目的要明确：根据微生物的种类、培养目的等确定配制培养基的种类，因为不同的微生物对培养物质的需求不同。 　　（2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。 　　（3）pH要适宜：细菌pH为：6.5～7.5；放线菌pH为：7.5～8.5；真菌pH为：5.0～6.0。 （二）无菌技术 1、什么是无菌技术？ 　　无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法，包括： 　　（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒； 　　（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌； 　　（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行； 　　（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 2. 消毒和灭菌有何不同？ 比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能　　灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。 3、常用的消毒和灭菌方法有哪些？ 　　（1）消毒的方法： 　　①煮沸消毒法：100℃煮沸5～6min； 　　②巴氏消毒法：70～75℃下煮30min或 80℃下煮15min； 　　③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源； 　　④紫外线消毒：接种室、接种箱、超净工作台用紫外线照射30min。 　　（2）灭菌的方法： 　　①灼烧灭菌 　　例如：接种环、接种针、试管口等。 　　②干热灭菌：160～170℃下加热1～2h。 　　例如：玻璃器皿、金属用具等。 　　③高压蒸气灭菌：是最常用的灭菌方法，100kPa、121℃下维持15～30min。 　　例如：培养基、无菌水等。 思考： 1、无菌