- 1、本文档共92页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
分子生物学实验课 ;实验仪器的使用及注意事项;?一、加样器
1、 用途
2、 如何使用?;练习:加样器读数为 100,实际体积各为多少?;
1)选择加样器
观察读数;调节读数;
2)安装吸头(紧密);
3)吸取液体
按加样器第一挡;将吸头插入液面下适当深度;松开拇指(缓慢),吸取液体
4)打出液体
抬起加样器;估计体积是否正确;移入容器;按到加样器第二档;打出液体(匀速);加样器使用注意事项:; 1、打开电源
2、离心管中的液体为2/3,盖紧盖子,防止离心机被腐蚀。;实验课的整体安排(两条线);PCR引物设计及相关软件数据库的使用;介绍如何查找基因的序列;介绍常规的生物学软件的使用;(一)如何查找基因的序列;GenBank 数据库;1. 打开/ ;三种途径可以从Genbank数据库中查到基因的序列;1. 根据文献; ,在Search后的下拉框中选择Nucleotide,把Genbank ID号输入GO前面的文本框中,点“GO”,就可以找到他了;;打开/ ;Limits的意思其实就是高级检索,你可以在这里对检索词进行很多限制,这样能大大精简查询结果。;这样就能获得我们所想要寻找的基因信息。
提醒:注意一下右侧的基因
相关信息,很有用的。;;;若你只想获得序列(例如设计PCR引物,可以选择FASTA格式。
FASTA格式的序列文件,没有其他数字和格式的干扰。;在获得FASTA格式的序列后,需要关注一下Genebank 中CDS的信息,来确认该基因的编码序列。;IFN-? cDNA的编码序列;3. 从Nucletide数据库中直接查找序列;;与gene 数据库进入,查找的序列是一样的。;2.从Gene 数据库种查找基因序列的优势:;(二)如何设计PCR引物;什么是引物?
引物设计的原则是什么?
介绍常用的引物设计的软件。
引物同源性分析;引物是人工合成的两段寡核苷酸序列。;引物设计的原则;;(4)引物方向:5?→3?;引物5 ?端修饰包括:加酶切位点;
引入点突变、插入突变、缺失突变序列;
加入其它短序列包括起始密码子,终止密码子。
标记生物素、荧光、地高辛等;
; 引物的5’-端设计限制性酶切位点后PCR示意图;(7)引物内部不应存在互补序列。以避免折叠成发夹结构(Hairpin);(9)比较引物与基因组的同源性;已知IFN-? cDNA序列, 你该如何设计引物?;1. 设计PCR引物
---扩增目的基因的全长
;扩增目的基因的全长;
5’ ATGAAATATACAAGTTATATCT …………………….TCGAAGAGCATCCCAGTAA 3’
3’ TACTTTATATGTTCAATATAGA………………………..AGCTTCTCGTAGGGTCATT 5’
;第二步:GC比值;Tm值;第三步:检测引物的发夹结构,二聚体等。;经过上述三个步骤后,即将获得扩增IFN-gamma全长的引物:;扩增目的基因的部分序列;Homo sapiens high mobility group box 1 (HMGB1), mRNA
NCBI Reference Sequence: NM_002128.4
gi|118918424|ref|NM_002128.4| Homo sapiens high mobility group box 1 (HMGB1), mRNA
TGGAGAGTAATGTTACAGAGCGGAGAGAGTGAGGAGGCTGCGTCTGGCTCCCGCTCTCACAGCCATTGCAGTACATTGAGCTCCATAGAGACAGCGCCGGGGCAAGTGAGAGCCGGACGGGCACTGGGCGACTCTGTGCCTCGCTGAGGAAAAATAACTAAACATGGGCAAAGGAGATCCTAAGAAGCCGAGAGGCAAAATGTCATCATATGCATTTTTTGTGCAAACTTGTCGGGAGGAGCATAAGAAGAAGCACCCAGATGCTTCAGTCAACTTCTCAGAGTTTTCTAAGAAGTGCTCAGAGAGGTGGAAGACCATGTCTGCTAAAGAGAAAGGAAAATTTGAAGATATGGCAAAAGCGGACAAGGCCCGTTATGAAAGAGAAATGAAAACCTATATCCCTCCCAAAGGGGAGACAAAAAAGAAGTTCAAGGATCCCAATGCACCCAAGAGGCCTCCTTCGGCCTTCTTCCTCTTCTGCTCTGAGTATCGCCCAAAAATCAAAGGAGAACATCCTGGCCTGTCCATTGGTGATGTTGCG
您可能关注的文档
- 分子生物学实验课 RNA提取.ppt
- 分子生物学实验课 第二次课PCR T-A 连接实验 课件.pdf
- 分子生物学实验课 第三次课 感受态制备 转化.pdf
- 分子生物学实验课 逆转录反应.ppt
- 分子生物学实验课 实验二、 目的基因片断的体外扩增.ppt
- 夫精人工授精.ppt
- 服务部制度1、服务部清洁卫生标准.doc
- 服务部制度8、退菜管理规定(原).doc
- 辅导员工作定位及少先队课程建议.pptx
- 妇产科学课件 6-胎盘早剥.ppt
- 2020版 沪科技版 高中生物学 必修2 遗传与进化《第4章 生物的进化》大单元整体教学设计[2020课标].docx
- 情绪价值系列报告:春节消费抢先看-国证国际证券.docx
- 精品解析:北京市东直门中学2023-2024学年高二下学期3月阶段性考试(选考)物理试题(解析版).docx
- 2020版 沪科技版 高中生物学 必修2 遗传与进化《第4章 生物的进化》大单元整体教学设计[2020课标].pdf
- 2020版 沪科技版 高中生物学 选择性必修1 稳态与调节《第1章 人体的内环境和稳态》大单元整体教学设计[2020课标].pdf
- 2020版 沪科技版 高中生物学 选择性必修1 稳态与调节《第1章 人体的内环境和稳态》大单元整体教学设计[2020课标].docx
- 液冷盲插快接头发展研究报告-全球计算联盟.docx
- 精品解析:北京市东直门中学2023-2024学年高二下学期3月阶段性考试(选考)物理试题(原卷版).docx
- 精品解析:北京市东直门中学2024届高三考前练习数学试卷(解析版).docx
- 2020版 沪科技版 高中生物学 选择性必修1 稳态与调节《第2章 人体的神经调节》大单元整体教学设计[2020课标].docx
文档评论(0)