三种奶牛常见病菌多重PCR诊断方法的建立.pdfVIP

? Journal ? ??? Science and ????? ???? V01??34 No??4 ?? 实用价值和公共卫生意义。 程公司合成???。 1??2??3????????????PCR????PCR??? mix 1?????????? ????约梁薪?杏ü舛?縋?，操作按照说明 ?? 材料 书进行。在???? ??窃诵蠵?程序，程序 1??1??1??????????收集我市古城乳业奶牛厂患 ??????50????2????? ????鲅??? 病奶牛的奶液，共?份。 ℃，? s??60??15s??72??15s)??40??????(95?? 1??1??2 标准品 含有目的基因的???重组 ? s??74??30s)????????????????????????????2 质粒作为标准品，重组质粒由上海生工?本?公司 组反应????馗?次。 提供。 1??2??4????????程序运行完毕，仪器自动给出 1??1??3阳性对照 ????104??????L???????????值，再进行溶解曲线分析。 阳性对照。 ????????Ct??35?????????????????????? 1??1??4阴性对照 采用核酸提取试剂盒中的洗脱 ????????????????????????Ct??35???????????? 液作为阴性对照。 提取样本。 1??1??5内部控制 ????????RnaseP??????????????????Ct??35?????????????????????? ??????PCR???????????????? ????????????????????????ct??35???????????? ?? 方法 污染，需重配制反应体系。 1??2??1标本中总核酸的抽提 奶液??癓，采用 ????????????Ct????35?????????????? Magna ?? ? robot(Roche Molecular Systems?? ?的单峰，则说明反应体系和程序运行良好；若阳 ????，????试剂盒抽提核酸。操作按 控品没有达到预期的峰，则需要检查反应体系和程 照说明书进行。 序编辑是否有误。 1??2??2引物 针对细菌靶基因保守区设计引物作 每个组与其相对应的阳控品比较，出现对应的 为特异性引物，再对特异性引物的两端分别加上通