2-色谱法的基本原理讲义.ppt

 第二章 色谱法的基本原理;本章基本要求;2.1 概 述;胡萝卜素（橙色）;⑴ 色谱法：借助在两相间分配系数的差异，而使混合物中各组分获得分离的技术称为色谱分离技术。 ⑵ 固定相：填充柱内的填料（固体或液体）。 ⑶ 流动相：携带样品流过固定相 (气体、液体和超临界流体)。 ⑷ 色谱柱：装有固定相的柱。 色谱分离过程：当流动相中携带混合物经过固定相时，与固定相发生作用，由于各组分的结构性质（溶解度、极性、蒸汽压和吸附能力等）不同，这种相互作用产生强弱的差异。在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，按先后不同的次序从固定相中流出。; 气相色谱 -------- 用气体作流动相 液相色谱 -------- 用液体作流动相 由于固定相可分为固体吸附剂和涂在固体担体上或毛细管内壁上的液体固定相，故可将色谱法分为下述四类： 气–固色谱 气体 固体 流动相 固定相 液体 液体 ; ①柱色谱：固定相装在柱管内。它又可分为填充柱色谱和毛细管柱色谱。固定相装在色谱柱（玻璃管或毛细管）内。 ②纸色谱：用滤纸作固定相或载体，把试样液体滴在滤纸上，用溶剂将它展开，根据其在纸上有色斑点的位置与大小，进行鉴定与定量测定。 ③薄层色谱：将固定相研磨成粉末，再涂敷成薄膜。样品的分离形式类似纸色谱。;①?吸附色谱 （L-S，G-S）：利用吸附剂对不同组分物理吸附性能的差异进行分离。? ②?分配色谱（L-L，G-L）：利用不同组分在两相中分配系数的不同进行分离。在液-液分配色谱中，根据流动相和固定相相对极性不同，又分为正相分配色谱和反向分配色谱。 ③?离子交换色谱（L-S）：利用组分离子与离子交换剂的交换能力不同进行分离。 ④?空间排阻色谱（凝胶色谱法，L-S）：用多孔物质对不同大小分子的阻碍作用进行分离。固定相是一种分子筛或凝胶，利用各组分的分??体积大小不同而进行分离的方法。 ⑤ 亲和色谱：利用不同组分与固定相的高专属性亲合力进行分离的技术，常用于蛋白质的分离。;色谱法的分类大致如下： 根据以上所述，将色谱法的分类总结于下表中：;2.2 色谱分离原理 ;进样;2.3 色谱流出曲线 ;;1、 有关术语;死时间tm : 不被固定相吸附或溶解的组分进入色谱柱时，从进样到柱后出现浓度最大值所需的时间。对于气相色谱，常把空气(TCD)和甲烷(FID)从进样到出峰的时间称为tm。如图中O-A’。这种物质不被固定相吸附或溶解，其流速与流动相的流速接近。测定流动相平均线速度ū 时可用柱长L与死时间tm 的比值计算。;保留时间 tR 试样从进样开始到柱后出现色谱峰极大值所需要时间。如图中O-B。它相应于样品到达检测器所需的时间。 tR = tR′+ tm 调整保留时间tR′ 扣除死时间后的组份保留时间， 即 tR′ = tR ? tm 组分在色谱柱中的保留时间tR包含了组分随流动相通过柱子所需的时间和组分在固定相中滞留的时间；tR′实际上是组分在固定相中滞留的时间。单位(s)或(cm)。;死体积 Vm 不能被固定相滞留的（惰性）组分从进样到出现峰最大值时所消耗的流动相的体积。死体积可由死时间与流动相体积流速F0（L／min）计算： Vm = tm·F0 保留体积 VR 从进样开始到柱后被测组份出现浓度最大值时所通 过的流动相体积。如下：  VR = tR·F0;调整保留体积VR′ 某组份的保留体积扣除死体积后，称该组份