微生物脓汁粪便实验报告.docx

医学微生物学实验报告 一、实验题目：脓汁和粪便标本中病原菌的检测 二、实验目的： 1、了解细菌生长的基本营养条件。熟悉培养基的种类。掌握培养基制备的原则和一般方法。了解理化因素对细菌的影响。掌握常用的消毒灭菌法和无菌操作技术。 2、掌握病原菌的分离与培养方法。了解并比较细菌在固体、半固体及液体培养基上的生长特征。 3、掌握油镜的正确使用、细菌涂片标本的制备。掌握革兰氏染色法。熟悉细菌的基本形态。了解细菌的特殊结构。熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。掌握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。掌握玻片凝集试验的原理、方法、结果观察与判断。熟悉药物敏感性试验方法的种类、原理及应用。掌握纸片扩散法。 三、实验器材 接种环，接种针，酒精灯，脓汁标本1支，粪便标本1支，碘酒棉球1瓶，酒精棉球1瓶，眼科镊子2把???伊红美兰平板，营养琼脂平板；斜面培养培养基，营养肉汤，生理盐水，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张，半固体琼脂培养基，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，药敏试验培养物4个 四、方法与步骤 4.1实验原理 （1）、培养基制备：用人工方法将微生物生长繁殖所需要的多种营养物质，按比例混合配制而成的营养制品，其主要用途是分离培养纯种微生物，传代或保存微生物，鉴别微生物的种属，研究微生物的生理及生化特性。 （2）、细菌的分离与培养：细菌学检验，特别是细菌培养必须是无菌操作。细菌的接种技术主要有：平板划线分离法，斜面、液体或半固体培养基接种法。为避免在接种过程中污染环境和空气中的细菌污染培养物，要求在酒精灯旁进行细菌接种。采用一般培养法即需氧培养法，将已接种好的培养基置于37℃恒温箱中培养18～24小时，一般细菌即可在培养基中生长繁殖。 （3）、半固体培养基接种法(穿刺接种法)：不同的细菌生长在一定的培养基上往往有不同的特征，因此，培养特征可以作为细菌分类鉴定的重要依据。 （4）、细菌个体形态特征的观察：细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物，在一定环境下有相对恒定的形态结构。尽管细菌菌落肉眼可见，但要观察单个细菌细胞，必须借助光学显微镜将其放大900～1000倍在微生物学中主要使用的是油镜。油镜是因为在使用时需要香柏油作介质而得名。细菌菌体在强光下呈透明或半透明，其折光系数与玻璃片相似，在光学显微镜下难以看清楚，所以，必须将细菌制成涂片，固定后，用化学染料使菌体着色，从而和周围背景产生鲜明对比，才能观察到细菌的形态与结构。复染法，即鉴别染色法，是用两种或两种以上染料，可将细菌染成不同的颜色，用于协助鉴别细菌。常用的复染法有革兰氏染色法和抗酸染色法。革兰氏染色法将细菌分成两大类：革兰阳性(G+)菌和革兰阴性(G-)菌。 （5）、细菌生化反应鉴定：①血浆凝固酶试验：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的人或兔等动物血浆发生凝固，凝固的血浆沉积于菌体表面，阻碍吞噬细胞的吞噬，或即使被吞噬，血浆凝固酶是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标。②糖发酵试验：单糖发酵微量管是只含有一种糖(如葡萄糖、乳糖)的pH7.6的蛋白胨水，并加入一定量的指示剂。接种细菌经培养后，若该菌具有分解该糖的酶，有酸产生时就能使指示剂变色。如指示剂为酸性复红［pH4.2(红色)～6.2(黄色)］，则变成红色；溴甲酚紫［pH5.2(黄色)～6.8(紫色)］则呈黄色。若有气体产生，则微量管内集聚气泡。 （6）、细菌血清学鉴定：血清学反应是指抗原抗体在体外的特异性结合反应，可用已知抗原检测未知抗体或用已知抗体检测未知抗原。常见的有凝集反应、沉淀反应、补体结合反应和中和反应等。血清学反应常用于传染病的诊断和微生物菌株的鉴定。将已知的抗体(诊断血清)直接与未知的颗粒性抗原物质(如细菌)混合，在有适当电解质存在条件下，如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性；如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性，称为直接凝集反应，属定性试验，有玻片法和试管法两种，主要用于检测抗原，如菌种的鉴定与分型、ABO血型鉴定等。 （7）、细菌药物敏感性试验：纸片扩散法：是利用抗生素在琼脂培养基的扩散渗透作用，将含已知浓度的药物滤纸片贴于含有敏感性试验菌的琼脂培养基表面，抗生素就自纸片向平板四周扩散渗透，在抑菌浓度所达范围内敏感菌的生长被抑制而出现抑菌圈，通过比较抗生素浓度与抑菌圈的大小以测定抗生素的抑菌浓度。 4.2实验步骤 （1）培养基制备的一般程序：①调配→溶化→ 矫正pH →分装→灭菌→检定→保存。②干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→灭菌→检定→保存。 （2）、细菌的分离与培养： ①细菌的分离：烧灼灭菌接种环→分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和依红美蓝平板上，各做两份→烧灼接种环上的多余的标本→